在蛋白質(zhì)定量試驗(yàn)中，zui常用的方法是BCA法蛋白定量。那么為什么我們要選擇用BCA法?而且常常使用到bca蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）。因?yàn)锽CA法蛋白定量具有很多優(yōu)點(diǎn)，如1.實(shí)驗(yàn)操作十分簡(jiǎn)單方便;2.實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短，快速;3.試劑靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確;4.所用的試劑穩(wěn)定性好，而且經(jīng)濟(jì)實(shí)用，抗*力強(qiáng)等。

實(shí)驗(yàn)原理：

BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量：在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret reaction)。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.步驟簡(jiǎn)單，45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。

2.靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml，zui小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg，待測(cè)樣品體積為1-20μl 。

3.BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。

4.在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

5. 檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 先將solutionA 搖晃混勻，根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積solution A加1體積solutionB試劑(50:1)配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：*溶解蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(5mg/mlBSA,-20℃保存)取10微升用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋)，使終濃度為 0.5mg/ml。

將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品(0.5mg/ml)按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20微升。

3.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液不足道20ul。

即：將蛋白質(zhì)樣品作適當(dāng)稀釋(多做幾個(gè)梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋。

4.在 各孔中加入200微升BCA工作液，這時(shí)使用加樣槍輕柔吹打，將其中液體混勻，這時(shí)請(qǐng)注意，盡量小一點(diǎn)力氣輕柔一點(diǎn)，不要弄出很多氣泡，這樣會(huì)影響讀數(shù))，然后再37℃室內(nèi)放置30-60min。將液體冷卻至室溫，在酶標(biāo)儀上測(cè)定A562nm，或540-590nm之間的波長(zhǎng)的吸光值，zui后可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白質(zhì)的濃度，為樣品蛋白質(zhì)定量。

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