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血清的培養與分類

時間:2012-2-10閱讀:1689

 血清的培養與分類

拜力生物編輯整理:
血清,以牛血清同馬血清為zui常用。血清內含有多種促細胞生長因子,促貼壁因子及其它活性物質等。一般需加10%-20%。
附著底物:
1、玻璃
2、一次性聚氯乙烯材料
3、飼細胞(Feeder cell)用成纖維細胞或其他細胞長成單層后,再用大劑量射線照射,使細胞失去增殖能力但尚存活同有代謝功能。將特別難培養地細胞接種于其上。
體外培養細胞成功率分析
成功地關鍵:培養物必須貼附在底物上
細胞生長同增殖
1、培養條件
2、組織同細胞地供體年齡
3、貼附底物
4、培養方法:酶消化分離
組織培養設施同基本條件
實驗室設計:細胞培養是一種無菌操作技術,要求工作環境同條件必須保證無微生物污染同不受其它有害因素地影響。細胞培養室同設計原則是防止微生物污染同有害因素影響,要求工作環境清潔、空氣清新,干燥同無煙塵。細胞培養室地設計原則一般是無菌。操作區設在室內較少走動地內側,常規操作同封閉培養于一室,而洗刷消毒在另一室。常用設施及設備
1、超凈工作臺;
2、洗刷消毒間:烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。
3、無菌操作間:一般由更衣間、緩沖間同操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好地無菌物品等。
4、分析間:顯微鏡、計算機及打印機等。
5、操作間:普通培養箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物
培養器皿
常用地器皿有下面幾種。
1、液體儲存瓶:用于儲存各種配制好地培養液、血清等液體,常用規格有500ml、250ml、100ml。
2、培養瓶:根據培養細胞種類要求不同培養瓶地形態各異,規格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等幾種
3、培養皿:用于開放式培養及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm
4、培養板
培養用液:(Balanced Salt Solution,BSS)、天然培養基(Natural Medium)、合成培養基(Synthetic Medium)Hanks’、 (Hanks’ Balanced Salt Solutions,HBSS)
成分 含量(g/L)
CaCl2 (無水氯化鈣) 0.14
KCl 0.40
KH2PO4 0.06
MgCl2?6H2O 0.10
MgSO4?7H2O 0.10
NaCl 8.00
NaCO3 0.35
Na2HPO4 0.048
D-Glucose 1.00
Phenol Red 0.01
鈣鎂有促使細胞凝結作用,配制離散細胞用地消化液同細胞洗滌液時,宜采用D-Hanks
天然培養基
血清 細胞培養液中添加地血清有牛血清、馬血清、人血清等,其中牛血清是zui常用地血清,分為胎牛血清同新生小牛血清
熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍地血清。加暖過程中須規則搖晃均勻。此熱處理地目地是使血清中地補體成分(complement)滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清地質量 。
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