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蛋白質分離純化程序

時間:2015/10/16閱讀:403
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(一)材料的預處理及細胞破碎

    分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態,不喪失活性。所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有:

1. 機械破碎法

    這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。

2. 滲透破碎法

    這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。

3. 反復凍融法

    生物組織經凍結后,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。

4. 超聲波法

    使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。

5. 酶法

    如用*破壞微生物細胞等。

(二) 蛋白質的抽提

    通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結構破壞,利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。

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