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天津醫科大學Nature子刊凋亡檢測新技術

時間:2013-7-18閱讀:425
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生物通報道  來自天津醫科大學的李兵輝(Binghui Li)博士領導的科研小組,開發出了一種新型的遺傳編碼熒光生物傳感器,證實在蛋白質裂解激活的條件下,這種傳感器可用于檢測細胞內的caspase-3活性。相關成果發表在7月16日的《自然通訊》(Nature Communications)雜志上。凋亡(apoptosis)同細胞增殖、分化一樣,是多細胞生命活動的基本特征之一,具有重要的生理意義。近年的研究表明,細胞凋亡不僅與許多正常的生理過程有關,而且細胞凋亡異常還是許多疾病產生的重要原因之一,如在腫瘤、免疫系統疾病/神經系統疾病及心血管系統疾病中,都已注意到存在異常的細胞凋亡。因此,細胞凋亡已成為近年生物學、細胞分子生物學及醫學等領域研究的熱點。相應地,其檢測方法也日益完善。
Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中 caspase-3 為關鍵的執行分子,它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個大亞基(17KD)和兩個小亞基(12KD)組成,裂解相應的胞漿胞核底物,zui終導致細胞凋亡。而在細胞凋亡的晚期和死亡細胞中,caspase-3的活性明顯下降。為了方便監測多細胞環境中的caspase-3活性,研究人員開發出了一種遺傳編碼接通熒光生物學傳感器(genetically encoded switch-on fluorescence-base indicator),這一傳感器是一種環化的嵌合體,其中包含有一個caspase-3裂解位點作為開關。當遭到類caspase-3蛋白酶裂解時,這一傳感器會發出熒光,由此可以實時監測這些caspases蛋白的活性情況。
研究人員構建出了組成性表達這些嵌合體的培養細胞,證實所有的健康細胞都不會發出熒光。而當將這些細胞暴露于凋亡刺激物之下時,死亡細胞顯示出與caspase激活相關的強熒光。利用這些工具,研究人員對各種條件下每個細胞中的caspase-3活性進行了實時監測,并*次在改良的軟瓊脂克隆形成實驗(soft agar assay)證實了,癌細胞的環境可以影響它們對于*藥物的敏感性。這些生物傳感器將幫助研究人員更好地了解類caspase-3蛋白酶的生物學意義。                                                                          來源:生物通

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