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長期以來,中樞神經系統疾病一直是困擾人類健康的一大難題。1992年,Reynodls
【 1】等從成年小鼠腦紋狀體中分離出能在體外不斷分裂增殖,且具有多種分化潛能的細胞群,并正式提出了神經干細胞(Neural stem cells, NSCs)的概念,從而打破了認為神經細胞不能再生的傳統理論。NSCs的發現為中樞神經系統損傷疾病的治療及其傷后功能重建帶來了曙光。1997年 Mckay將 NSCs的概念總結為:具有分化為神經元、星形膠質細胞及少突膠質細胞的能力,能自我更新并可以提供大量腦組織細胞【 2】。隨著 NSCs在醫學和研究領域的應用逐漸增多,利用穩定的 NSCs細胞株,可以為關于 NSCs的深入研究包括細胞的活動、正常與非正常狀態等,以及體外構建神經組織代謝性疾病和腦組織損傷的藥物篩選模型,提供可靠的細胞資源,同時為研究工作節約寶貴的時間和培養費用。
本公司培養出品的取自 SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠(*軍事醫學科學院實驗動物中心,許可證號:SCXK-(軍)2007-004)胚胎大腦的 SVZ區,用 DFR03神經干細胞培養基(貨號: M1024)進行原代培養。傳代擴增至第二代凍存(DIV15),每支含 1×106個細胞。細胞經檢測,鏡下成球形生長(如圖 1所示);單克隆實驗及 Brdu染色證明其具備良好的增殖能力(如圖 2,圖 3所示);免疫熒光化學實驗表明,該細胞能表達 NSCs的標志性蛋白 nestin(如圖 4所示);5%胎牛血清誘導可分化稱為神經元(neuron)、星形膠質細胞(astrocyte)(如圖 5所示)。品名:ICR小鼠神經干細胞貨號:C3016規格:1×106cells/管產品特性:
1. SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠胚胎大腦的 SVZ區
2. 在特定的已知成分的無血清培養基可自我更新,倍增時間小于 48小時。
3. 在體外具有多分化潛能
4.穩定的正常二倍體細胞。質量控制:本產品經過了細菌、真菌、霉菌、支原體檢測。運輸與保存:
本品使用 10%DMSO凍存液冷凍,采用干冰保存運輸,收到細胞后,如果不立即復蘇,請將細胞放入液氮中保存待用。切勿置于室溫下,以免造成 DMSO損傷。細胞復蘇方法:
取出凍存管后,投入 37℃水浴中,震蕩解凍,酒精消毒管壁外側后,將其轉入超凈臺中,將管內細胞轉移至離心管中,加入 5mlDFR03神經干細胞培養基, 1000轉,離心 5分鐘,棄去上清,在加入 5mlDFR03神經干細胞培養基,轉入培養瓶中培養。產品承諾:
實驗室研究結果表明,本株 ICR小鼠 SVZ來源的 NSCs體外增殖 10代后,仍能夠保持神經干細胞良好的特性。建議使用本公司配套的培養基和正確的培養方法來解凍、傳代,以此保證細胞具備良好的增殖和分化能力。使用:
本產品只提供給進一步的科研使用,不可應用于臨床。附圖(供參考)
圖 1.體外培養 15天( DIV15),第二代 NSCs在培養基中懸浮成球生長圖 2在 1%膠原水凝膠中 NSCs由單個細胞形成克隆球
圖 3.BrdU熒光染色
圖 4.原代 NSCs的 nestin染色陽性
圖 5.由 NSCs誘導分化得到的神經元(β -tubulin III陽性 ,綠色)和星形膠質細胞( GFAP陽性,紅色)
參考文獻
【1】 Reynolds BA, Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science,1992, 255(5052):1707-1710.
【2】 McKay R. Stem cells in the central nervous system. Science, 1997,276(5309):66