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ELISA試劑盒各環節中常見問題及解決方法

2023-2-7  閱讀(740)

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ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。

 

將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啟發,提高試驗質量。

 

下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法一、選擇試劑

 

選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

 

二、加樣

 

可能原因:

 

1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

 

解決辦法:

 

1)ELISA試劑盒標本為血清:zui hao將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣,zui  hao選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時,請分批操作。

 

三、 孵育

 

可能原因:

 

1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗che底; 2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗che底。

解決辦法:

 

1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

 

四、洗板

 

可能原因:

 

1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不che底;洗板針堵塞,抽吸不wan全;洗板不暢,導致洗板效果差。3) 反應板過多造成洗板等待時間長。

 

解決辦法:

 

1)ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后zui hao在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。


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