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ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的機會,只需*靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐步平衡的進程,因而需經(jīng)分散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。
elisa試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA辦法作反響動力學研究時,實驗標明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快反響,可提高反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中夜,以形成*多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中一般不予選用。
保溫的辦法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,*后將ELISA板放在濕紗布上。
濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時,ELISA板只需平置于操作臺上即可。ELISA試劑盒應留意溫育的溫度和時刻應按規(guī)則力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板一起測定。
怎么辦理ELISA試劑盒的質(zhì)量操控問題。
1、斷定操控的目標;
2、規(guī)則操控目標的標準(預期值);
3、擬定或選擇操控辦法和手法;
4、丈量實踐數(shù)據(jù);
5、比較或較對實踐數(shù)據(jù)與預期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預訂差錯范圍,報警系宣布信號,反應通道中止。
6、采納舉動,解決差異。恢復原狀(原標準狀態(tài))的手法發(fā)揮作用。
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