人β-血小板球蛋白(βTG) ELISA Kit

ELISA 樣本的處理 
ELISA 檢測的目的是為實驗提供準確可靠的定量分析實驗依據。為了保證實驗數據的可靠
性，在實驗過程中必須堅持全面質量控制和全過程質量控制。在收集標本前都必須有一個完整的計劃。 
人β-血小板球蛋白(βTG) ELISA Kit注意事項： 
每個標本量收集體積＝  100ul × 檢測種類，如要做復孔，標本量收集體積＝  100ul × 檢測
種類×2 。 
對于作某一個具體指標來說，先用一系列稀釋度作一批標本測定，得出對實驗有意義
的一個稀釋度（即測定劑量反應曲線），然后用一個zui適稀釋度測定即可。 
 收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在 
4 ℃ 備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在  -20 ℃ 或  -70 ℃ 條
件下保存。避免反復凍融。標本  2 -8 ℃ 可保存  48 小時，   -20 ℃ 可保存  1 個月。   -70 度
可保存  6 個月。部分激素類標本需添加。 
血清標本采集時，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，
以 HRP為標記的 ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。 
為了保證尿液檢測結果的準確性，必須正確收集尿液標本和保存。盛尿容器要清潔干燥。       
使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染，影響檢
測結果。尿液標本必須新鮮，留取后，應及時檢測或保存，以免細菌繁殖。因在室溫中久
置后（尤其是夏季）尿中磷酸鹽等可析出結晶而干擾檢測。 
標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性 HRP，也會產生假陽性反應。
保存過久可發生聚合在 ELISA中可使本底加深。 
凍結標本融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛
倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。 
混濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。 
反復凍融會使蛋白效價降低，所以待測標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。也可
加入適當防腐劑。 

人β-血小板球蛋白(βTG) ELISA Kit標本類型 
ELISA常見的標本一般包括： 
液體類標本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。 培養細胞 組織標本 這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。 
標本的保存 
一般說來，在 5 天內測定的標本可放置于 4℃，超過一周測定的需低溫凍存。 
對收集后當天進行檢測的標本，儲存在  4 ℃ 備用，如有特殊原因需要周期收集標本， 
將標本及時分裝后放在  -20 ℃ 或  -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。 
標本  2 -8 ℃ 可保存  48 小時，  -20 ℃ 可保存  1 個月。  -70 度可保存  6 個月。部分標本也可加入適當防腐劑，激素類標本需添加。  
 
標本的處理 
可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、
細胞培養上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定，有些則需經預處理。 
血清：   
室溫血液自然凝固  10-20 分鐘后，離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。   
血漿：   
應根據試劑盒的要求選擇  EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入  10 ％（  v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或  1% heparin 或  2.0%EDTA.Na2) 混合  10-20 分鐘后，離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形 成，應再次離心。   
尿液、胸腹水、腦脊液：   
用無菌管收集。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，
應再次離心。   
 細胞培養上清：   
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集
上清。檢測細胞內的 成份時，用  PBS （  PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到  100 萬 
/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。   
細胞： 
檢測細胞的成份時，對于貼壁細胞，去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上清，即可進行后續操作。 
組織標本：   
切割標本后，稱取重量。加入一定量的  PBS或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心  20 分鐘左右（  2000-3000 轉  / 分）。仔細收集上清置于  -20 度或  - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。