小鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)  ELISA Kit

樣本保存條件：
2-8℃冰箱zui多放2周
-20到-50℃的冰箱可以放3-6個月
-50℃以下的冰箱，可以放一年

樣本收集
血清樣本用干燥管（紅色）或者促凝管（黃色）收集
血漿用抗凝管，一般有EDTA抗凝（紫色）、枸櫞酸鈉抗凝（黑色或者藍色）

小鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)  ELISA Kit
樣本組織勻漿
動物組織勻漿（細胞）：
              1g組織加入9ml PBS（濃度為0.1M，pH為7.4的）測那種分泌型的指標(biāo)
              1g組織加入1ml組織裂解液加入8ml PBS   測細胞內(nèi)的
糞便樣本：1g樣本+9ml PBS（濃度為0.01M，pH為7.4的）
沒有PBS的話也可以用一下生理鹽水，還是用PBS

樣本離心轉(zhuǎn)速及時間
試管采集的樣本：3000轉(zhuǎn)，離心五分鐘取上清
離心管或者EP管采集的樣本：5000--8000轉(zhuǎn)3分鐘取上清

實驗所需樣本的量
普通的試劑盒是每個指標(biāo)每個孔需要10μl樣本，bioswamp的每個指標(biāo)每個孔需要40μl
如果老師要代測N個指標(biāo)的的話，用的是普通盒子，需要的樣本量就是N*10μl，然后讓他多給50μl，以免樣本貼壁吸不上來。
產(chǎn)品名稱：
規(guī)格：96T/48T
檢測標(biāo)本：血清,血漿,尿液,胸腹水,腦脊液,細胞培養(yǎng)上清,組織勻漿等
檢測方法：ELISA
檢測類型：酶聯(lián)免疫夾心法
運輸保存：2~8°保存6個月
齊一生物主要經(jīng)營進口原裝Elisa試劑盒全國：,種類齊全,價格實惠,購買齊一生物產(chǎn)品的新老客戶,可享免費代測實驗服務(wù),可檢測人源,小鼠,大鼠,豬,狗,猴,兔,羊,雞,牛,鴨子,魚,植物等各種樣本.全程提供.如需其他Elisa試劑盒說明書及報價,可齊一生物.
特點
一、、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、節(jié)省實驗經(jīng)費.
elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實成分有密切的關(guān)系,說明方法的準(zhǔn)確度.比如水中總無機氯含量測定,樣品水中含有無機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L,則認為回收率為99%.
制備方法
包括以下步驟：
1)抗原表位的計算機篩選；
2)抗原的制備；
3)血清的采集；
4)間接ELISA方法的建立；
5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；
6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；
7)對屠宰場進行臨床檢測.該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好.應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測,可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播.
組成結(jié)構(gòu)
1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激.使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管.收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離.
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測.1000×g離心30分鐘去除顆粒.
3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物.
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎.1000×g離心10分鐘,取上清液.
5、保存：如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍.盡可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾.不要在37℃或更高的溫度加熱解凍.應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中產(chǎn)品定量檢測試劑盒成分
1預(yù)包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化96T
2酶標(biāo)記抗體:(30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化0.4mLx1
3標(biāo)準(zhǔn)品:重組小鼠白介素-60.5mLx2
4EIA緩沖液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS30mLx1
5標(biāo)記抗體稀釋液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS12mLx1
6顯色劑:TMB底物液15mLx1
7終止液:1N硫酸12mLx1
8濃縮洗滌液:(40倍濃縮)含1%BSA,0.05%吐溫20BPS50mLx1操作說明1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供)酶標(biāo)儀(450nm)微移液管及其吸嘴量筒及燒杯去離子水冰箱(4°C)坐標(biāo)紙(log/log)吸水紙試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋)溫育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)
操作方法
雙抗體夾心法
小鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)  ELISA Kit1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml.在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃隔夜.次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘.（簡稱洗滌,下同）.
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時.然后洗滌.（同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔）.
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml.37℃孵育0.5～1小時,洗滌.
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分鐘.
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml.
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示.也可測OD值：在ELISA檢測儀上,于450nm（若以ABTS顯色,則410nm）處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性.
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃隔夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌；
6.’zui后一遍用DDW洗滌.
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6.
發(fā)展前景
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展,而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用.分子生物學(xué)正在并zui終肯定會讓對整個生命科學(xué)有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性.
應(yīng)用領(lǐng)域
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷.也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等