細胞增殖實驗

摘要：在293T細胞中過表達human Oct-4基因， 通過CCK-8方法對Oct-4過表達細胞組、空細胞組與陰性對照組的細胞增殖進行定量，研究Oct-4基因對293T細胞增殖能力的影響。實驗結果顯示Oct-4基因的表達促進293T細胞的增殖能力。為進一步深入研究Oct-4基因的功能提供實驗數(shù)據(jù)。
關鍵詞：Oct-4，CCK¬¬-8，細胞增殖，293T

一、 實驗原理
細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞，用來補充體內衰老和死亡的細胞；同時，多細胞生物可以由一個受精卵，經(jīng)過細胞的分裂和分化，zui終發(fā)育成一個新的多細胞個體。通過細胞分裂，可以將復制的遺傳物質，平均地分配到兩個子細胞中去。細胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎。細胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK-8等方法。

二、 實驗目的
用質粒Oct-4-EGFP轉染后的細胞與正常細胞組、陰性對照組進行比較分析，考察Oct-4基因對細胞的增殖能力產(chǎn)生的影響。采用CCK-8 法對3組細胞進行比較分析。

三、 實驗步驟
實驗共分以下5個主要步驟：
1. 收集細胞：
收集細胞：將293T細胞消化后制成單細胞懸液，計數(shù)后，每組細胞配成一定濃度的單細胞懸液。
2. 細胞鋪板：
細胞配成2×104cell/ml后，每孔鋪100μl細胞，即2000cell/well。一般每個樣品設5~6個復孔，邊緣孔加100μl無菌水或者PBS。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3. 質粒轉染：
     16h后，按照轉染試劑說明書轉染細胞（0.2μg質粒，0.5μl和元生物轉染試劑）。
4. 細胞培養(yǎng)6、24、48、72h后CCK-8處理，酶標儀檢測：
轉染后， 在每個檢測時間點加入10μl的CCK-8于孔中，無需換液。3h后，酶標儀檢測450nm OD值。
5. 統(tǒng)計分析：
GraphPad Prism（Ver5，GraphPad Software） 作圖，并進行雙側t檢驗。

四、 實驗結果
                                                    表1. 293T過表達Oct-4基因CCK-8檢測數(shù)據(jù)（平均值，每組五次重復）

                                                      圖1. 過表達Oct-4對293T細胞增殖能力的影響

結論：從實驗結果統(tǒng)計分析可以發(fā)現(xiàn)，293T細胞在過表達Oct-4-EGFP后，72h時增殖能力均高于空細胞組以及對照組（p<0.001）。

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