脂肪酸合成酶（FAS）活性試劑盒詳細說明

【資料簡介】

脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說明書 
                                                分光光度法   50管/48樣 
注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。 
測定意義： 
FAS 是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍
表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和以及脂肪組織中表達豐富。 
測定原理： 
FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和 NADP+
；NADPH在 340nm
有吸收峰，而NADP+
沒有；通過測定340nm  光吸收下降速率，計算 FAS 活性。 
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說明書 自備儀器和用品： 
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。 
試劑組成和配制： 
試劑一：液體×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于 4℃充分解凍后混勻。 
試劑二：粉劑×1瓶。臨用前加入1100 μL試劑四，充分溶解。 
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入1100 μL試劑四，充分溶解。 
試劑四：液體×1瓶, 4℃保存。 
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入 2100μL試劑四，充分溶解。 
粗酶液提取： 
1.  組織：按照組織質量（g） ：試劑一體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000rpm，4℃離心 40min，取上清置冰上待測。 
2.  細菌、真菌：按照細胞數量（104
個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議500萬細胞加入 1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7
秒，總時間3min）；然后 16000rpm，4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測。 
3.  血清等液體：直接測定。 
FAS測定操作： 
1. 分光光度計預熱30min，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。 
2. 試劑四置于40℃水浴中預熱 30 min。 
3. 空白管：在 1mL石英比色皿中依次加入 100μL蒸餾水、 20μL試劑二、 20μL試劑三、 820μL
試劑四和40μL試劑五，迅速混勻后于 340nm處測定吸光值，記錄第 30s和 90s時吸光值，
分別記錄為A1和A2。△A 空=A1-A2。 
4. 測定管：在 1mL石英比色皿中依次加入 100μL上清液、 20μL試劑二、 20μL試劑三、 820μL
試劑四和40μL試劑五，迅速混勻后于 340nm處測定吸光值，記錄第 30s和 90s時吸光值，
分別記錄為A1和A2。△A 測=A3-A4。 
注意：空白管只需測定一次。 
FAS活性計算公式： 
（1）按照蛋白濃度計算 
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADPH  為1個酶活單位。 
FAS(μmol/min/mg prot) =[(△A測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V反總×106
] ÷(Cpr×V樣)÷T 
=1.61×(△A測定管–△A 空白管) ÷Cpr 
（2）按照樣本質量計算 
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADPH 為1 個酶活單位。 
FAS(μmol/min/g) =[(△A測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V反總×106
] ÷(W×V 樣÷V樣總)÷T  
=1.61×(△A測定管–△A 空白管) ÷W 
（3）按細胞數量計算 
活性單位定義：37℃中每104
個細胞每分鐘氧化1μmol NADPH  為1 個酶活單位。 
FAS(μmol/min/104
cell) = [(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106
] ÷(細胞數量×V樣÷V樣
總)÷T 
=1.61×(△A測定管–△A 空白管) ÷細胞數量 
（4）按液體體積計算 
活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1μmol NADPH  為1個酶活單位。 
FAS(μmol/min/mL) =[(△A測定管–△A空白管)÷ε÷d×V 反總×106
] ÷V 樣÷T 
=1.61×(△A測定管–△A 空白管)   
ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103
/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總
體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V 樣：加入
反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時間，1min。 
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說明書 注意事項： 
1.  上清液蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。 
2.  配制好的試劑4℃保存，三天內使用完畢。 
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