谷氨酸（glutamic acid）含量測(cè)定試劑盒

【資料簡(jiǎn)介】

谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量測(cè)定試劑盒說明書分光光度法 50 管/48 樣 
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 
測(cè)定意義： 
Gu廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20 種氨基酸之一，
而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu還是
味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。 
測(cè)定原理： 
利用提取液提取，然后用顯色劑進(jìn)行顯色，顯色后在 570nm 下進(jìn)行測(cè)定。 
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量測(cè)定試劑盒需自備的儀器和用品： 
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。 
試劑的組成和配制： 
試劑一：液體100mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑二：粉劑×1 瓶，  4℃保存；臨用前加入 10mL 蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑
仍  4℃保存。 
谷氨酸提取：  
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞
數(shù)量（104
個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 1000 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入
2mL 試劑一） ，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重
復(fù) 30 次）；8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g） ：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g組
織，加入 2mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 
3、血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積（mL） ：試劑一體積
(mL)為 1：5~10 的比例（建議取 0.2mL 血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一） ，進(jìn)
行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 
 
測(cè)定步驟 
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm，蒸餾水調(diào)零。 
2、 在有蓋 EP管中加入下列試劑： 
試劑名稱（μL）  測(cè)定管  對(duì)照管 
樣本  1000   
試劑一    1000 
試劑二  200  200 
混勻，90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失） ，流水冷卻，于570nm波長(zhǎng)處比色，△A=A
測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。 
注意事項(xiàng)： 
為提高檢測(cè)靈敏度，測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于 1，若大于1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適
當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。  
 
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量測(cè)定試劑盒 
谷氨酸含量計(jì)算： 
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423；  x為谷氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。  
2、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算 
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2）=304.9×(△A+2.423) 
3、按照蛋白濃度計(jì)算 
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr 
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算 
谷氨酸含量(µg/g鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W 
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 
谷氨酸含量(μg/104
 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423) 
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）
或細(xì)胞培養(yǎng)液體積，0.2 mL；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：
細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000萬。 
注意：該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測(cè)定，檢測(cè)下限為70µg/mL。 

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