細胞樣本的前處理

【資料簡介】

一、勻漿介質

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環境。

二、細胞樣本的前處理:

1、細胞沉淀的收集：

① 懸浮細胞: 對于懸浮培養的細胞，直接通過離心收集細胞沉淀，將培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

② 貼壁細胞: 對于貼壁培養的細胞，用*將細胞消化下來，或用細胞刮將細胞刮下來，將培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

我們一般建議客戶，細胞密度不要小于一百萬個/ml。

2、細胞沉淀的洗滌：

在細胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等滲）， 輕輕顛倒混勻，將培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

重復上述操作反復洗滌1～2次。

3、勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復凍融。

① 手工勻漿：在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。

② 超聲破碎:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進行如下操作:

     a、用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。

      b、用超聲細胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不*用裂解液進行裂解。

④ 反復凍融:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結冰，溶解，再結冰，再溶解，反復3次左右）。

                由于反復凍融對酶活力影響較大,一般不*使用

產品：

吳茱萸次堿標準品,cas:84-26-4對照品

20(s)-原人參三醇標準品,cas:34080-08-5對照品

鹽酸*對照品/標準品

蛇床子對照品/標準品

白果內酯標準品/對照品

*標準品/對照品

馬鞭草標準品/對照品

CAS:98243-57-3,湖貝甲素標準品/對照品

CAS:25956-17-6,誘惑紅標準品/對照品價格

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葶藶子(播娘蒿)標準品/對照品

去甲蟛蜞菊內酯標準品,cas:6468-55-9對照品

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CAS:486-66-8,大豆苷元標準品/對照品

阿里紅標準品/對照品

甲基丁子香酚標準品,cas:93-15-2對照品

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CAS:25127-29-1,克班寧標準品/對照品

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CAS:75239-63-3,麥冬二氫高異黃酮A標準品/對照品

去亞甲基小檗堿標準品,cas:25459-91-0對照品

蟲螨磷標準品|對照品,cas:60238-56-4

CAS:15862-07-4,2,4,5-三氯聯苯標準品/對照品價格

土荊芥標準品/對照品

7-乙基-10-羥基*標準品,cas:86639-52-3對照品

黃柏堿標準品/對照品

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吡嘧磺隆標準品|對照品,cas:98389-04-9

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CAS:78763-58-3,去芹糖桔梗皂苷 D標準品/對照品

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乙羧氟草醚標準品|對照品,cas:77501-90-7

5-｛4-［2-（5-乙基-2-吡啶基）乙氧基］苯基亞甲基｝-2，4-噻唑二酮(鹽酸*雜質)對照品/標準品

石見穿標準品/對照品

CAS:84954-92-7,洛塞維標準品/對照品

CAS:52756-25-9,麥草氟甲酯標準品/對照品價格

苯并(b)熒蒽標準品|對照品,cas:205-99-2

三白草酮對照品/標準品

桑皮苷C標準品,cas:102841-43-0對照品

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白果內酯對照品/標準品

雙氯*標準品|對照品,cas:343-55-5

*標準品/對照品

CAS:34681-10-2,丁酮威標準品/對照品價格

鎵標準溶液,cas:7440-55-3

*標準品/對照品

鹽酸吐根酚堿標準品,cas:5853-29-2對照品

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鹽酸*標準品/對照品

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CAS:68786-66-3,三氯苯達唑標準品/對照品價格

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反式－九氯標準品|對照品,cas:39765-80-5

間氨基酚標準品/對照品

菜薊苦素標準品,cas:35730-78-0對照品

3,4-二甲酚標準溶液,cas:95-65-8

*E標準品,cas:18444-66-1對照品

土荊皮乙酸對照品/標準品

CAS:127191-86-0,馬兜鈴內酰胺 A標準品/對照品

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(K,Na)多元素混合標準溶液（混標）標準品|對照品

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CAS:124961-61-1,多被銀蓮花皂苷R8標準品/對照品

*對照品/標準品

L-*對照品/標準品

異澤蘭黃素標準品,cas:22368-21-4對照品

亞硫酸氫鈉甲萘醌標準品|對照品,cas:130-37-0

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芥子苷單水合物標準品,cas:64550-88-5對照品

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炔草酯標準品|對照品

CAS:93675-88-8,連翹酯苷E標準品/對照品

CAS:144-80-9,*標準品/對照品價格

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