猴（Monkey）免疫球蛋白G（IgG）ELISA檢測試劑盒

【資料簡介】

本試劑僅供研究使用      標本：血清或血漿

試驗原理：

IgG試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IgG濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IgG和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IgG的濃度呈比例關系。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3. 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5. 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1. 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

80 g/L	（6號標準品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40 g/L	（5號標準品）	100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 g/L	（4號標準品）	100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 g/L	（3號標準品）	100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 g/L	（2號標準品）	100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 g/L	（1號標準品）	100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 g/L	（空白對照）	原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

1. 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（g/L）

A

80

80

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

B

40

40

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

C

20

20

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

D

10

10

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

E

5.0

5.0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

F

2.5

2.5

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

G

0

0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

H

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

局限

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IgG標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IgG含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-80g/L

4、敏感度： 0.1 g/L