細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

【資料簡介】

主要用途

 細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶（ISOCITRATE DEHYDROGENASE）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸（NADP）還原后峰值的變化，即采用比色法來測定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase；IDH；EC1.1.1.42）是三羧酸循環(huán)（citric acid cycle）或克雷布斯循環(huán)（Krehes cycle）中的酶之一，存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶：同源雙體，40至45Kd分子量；單體，80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi)，氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（oxidized β-Nicotinamide adenine dinucleotide –phosphate；NADP）依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子（Mn）的推動，脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳（氧化性脫羧基作用），轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸（α-ketoglutarate），同時生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（reduced β-Nicotinamide adenine dinucleotide –phosphate；NADPH）。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中，以及有限的葡萄糖條件下，異檸檬酸脫氫酶則失活，從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路（glyoxylate bypass）之間碳的流動。基于異檸檬酸脫氫酶的NADP依賴性，和作用后所產(chǎn)生的NADPH，通過分光光度儀的峰值變化（340nm 波長），來定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為：