動物細(xì)胞融合實驗

【資料簡介】

一、實驗?zāi)康?br />細(xì)胞融合是指兩個或兩個以上的細(xì)胞合并成為一個細(xì)胞的過程。在自然情況下，體內(nèi)和體外培養(yǎng)的細(xì)胞均能發(fā)生自發(fā)融合現(xiàn)象。人工方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合開始于50年，現(xiàn)在這項技術(shù)已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫，腫瘤及細(xì)胞工程的重要手段。通過實驗，了解細(xì)胞融合的原理，掌握細(xì)胞融合的基本方法。
二、實驗原理
在誘導(dǎo)物（如仙臺病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的細(xì)胞發(fā)生凝集，隨后在質(zhì)膜接觸處發(fā)生質(zhì)膜成份的一系列變化，主要是某些化學(xué)鍵的斷裂與重排，zui后打通兩質(zhì)膜，形成雙核或多核細(xì)胞（此時稱同核體或異核體）。通過有絲分裂，細(xì)胞核便發(fā)生融合，形成雜種細(xì)胞。
三、實驗用品
1. 器具 顯微鏡 離心機(jī) 天平 離心管 注射器 細(xì)滴管 載片、蓋片
2. 試劑 50%聚乙二醇(PEG)：稱取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度試管，在酒精燈火或沸水中加熱溶化。待冷至50℃時，加入等體積并預(yù)熱至50℃的GKN液混勻。
Alsver液：葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g，加重蒸水至100ml。
GKN 液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4?2H2O 1.77g，NaH2PO?2H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，溶于1000ml重蒸水中。
0.85%NaCl液
3. 材料 一齡公雞靜脈血
四、實驗內(nèi)容及方法
1. 用注射器取2ml Alsver液，再從翼下靜脈取雞血2ml，注入試管內(nèi)，再加6ml Alsver液，混勻后置4℃冰箱中可備作3—4天用。
2. 實驗時取“1”液1ml于離心管中，加入4ml 0.85%的NaCl液，混勻平衡后以1200r/min離心5分鐘。
3. 去上清液。再重復(fù)“2”兩次，zui后一次離心10分鐘。
4. 在沉降血球中加入1mlGKN液，混勻使之成為細(xì)胞懸液。（可加GKN液調(diào)節(jié)稀釋使每立方毫米含紅細(xì)胞3~4萬個）。
5. 在“4”液中加入6—8滴（約0.5ml）50%的PEG液，迅速混勻，常溫下2~3min滴片鏡檢。
觀察時注意不同程度的融合現(xiàn)象。通常分為五個階段。①兩細(xì)胞膜接觸，粘連；②細(xì)胞膜形成穿孔；③兩細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)連通；④通道擴(kuò)大，兩細(xì)胞連成一體；⑤細(xì)胞*合并，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。
6. 計算融合率：
融合率=