人5羥色胺（5-HT）操作步驟方法

【資料簡介】

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清及相關(guān)液體樣本中5 羥色胺(5-HT)的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人5 羥色胺(5-HT)水平。用純化的人5 羥色胺
(5-HT) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入5 羥色胺(5-HT)，
再與HRP 標記的5 羥色胺(5-HT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌
后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的
黃色。顏色的深淺和樣品中的5 羥色胺(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸
光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人5 羥色胺(5-HT)濃度。

操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。