RD 兔抗人神經肽Y 中文說明書

【資料簡介】

 

兔（Rabbit）神經肽Y（NPY）ELISA檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用

 

試驗原理：

        NPY試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知NPY濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內進行檢測。先將NPY和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中NPY的濃度呈比例關系。

 

試劑盒內容及其配制：

試劑盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶標板	1塊板（96T）	半塊板（48T）
塑料膜板蓋	1塊	半塊
標準品：1000pg/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白對照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
標準品稀釋緩沖液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
生物素標記的抗NPY抗體	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗滌緩沖液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
終止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

 

自備材料：

1.  蒸餾水。

2.  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.  振蕩器及磁力攪拌器等。

 

試劑的準備：

 

1.   標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

1000 pg/ml	（6號標準品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
500 pg/ml	（5號標準品）	100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
250 pg/ml	（4號標準品）	100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
125 pg/ml	（3號標準品）	100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5 pg/ml	（2號標準品）	100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.5 pg/ml	（1號標準品）	100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml	（空白對照）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

 

2.   洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

 

試劑盒性能：

 

1.   靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2.   特異性：不與其它細胞因子反應。

3.   重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

 

操作步驟：

 

1.   使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4.   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

8.   取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

結 果 判 斷 與 分 析：

 

1、  儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、  以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的NPY標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的NPY含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

3、  檢測值范圍： 0-1000pg/ml

4、  敏感度：3.9pg/ml