2013人瘦素ELISA試劑盒說明書

【資料簡介】

人瘦素ELISA試劑盒實驗原理：
瘦素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合瘦素分子上*抗原位點的單克隆抗體。一份含有內源性瘦素的病人樣本在包被孔中與特異性兔抗瘦素抗體進行孵育，之后就會形成一個夾心復合物。孵育后，用洗滌液洗去未結合的物質，再加入過氧化物酶標記的抗兔抗體以檢測結合在包被板上的瘦素的量。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中瘦素的濃度成正比。
試劑盒成分：
1）       包被板，12×8孔，可拆，微孔中包被了抗瘦素抗體（單克隆）
2）       標準品（0-5），6支 凍干型0.5mL，濃度：0,2,5,25,50,100ng/ml，內含0.3%的Proclin防腐劑
3）       質控品， 2支，200ul，即用，2個濃度（低與高），具體數值與范圍請見試劑瓶標簽或QC質控單。內含0.3%的Proclin防腐劑。
4）       實驗緩沖液，1支，11ml，即用，內含0.3%的Proclin防腐劑
5）       抗血清，1支，11ml，即用，單克隆瘦素抗血清，內含0.3%的Proclin防腐劑。
6）       酶復合物，1支，11ml ，即用，辣根過氧酶標記的抗兔復合物，內含0.3%的Proclin防腐劑
7）       TMB底物液，1支，14ml，即用
8）       終止液，1支，14ml，即用，內含0.5M的H2SO4，避免接觸終止液，以免刺激皮膚或灼燒皮膚。
9）       洗滌液（40×），1支 30ml
注：零標準品應視需要而定。
人瘦素ELISA試劑盒實驗步驟：
所有的標準品、質控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有的檢測條件都一樣。每一次實驗都有一條標準曲線。
1）將所需數目的板條置于板架上。。
2）用一次性吸嘴將標準品﹑質控品和樣品分別15μL加入相應的檢測孔中。
3）每孔加入100μL的檢測緩沖液。
4）充分混合10秒，在此步驟中充分混合非常重要。
5）室溫下溫育120分鐘。
6）快速棄去檢測孔中的內含物，每孔用300μL洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和度。
7）每孔加入100μL抗血清。
8）在室溫下溫育30分鐘。
9）快速棄去檢測孔中的內含物，每孔用300μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
10）每孔加入100μL酶聯物。
11）在室溫下溫育30分鐘。
12）快速棄去檢測孔中的內含物，每孔用300μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
13）每孔加入100μL底物液。
14）室溫溫育15分鐘。
15）每孔加入50μL終止液以終止酶反應。
16）在加終止液后10分鐘內于450±10nm處讀取OD值。
結果計算
1）計算每個標準品、質控品和病人樣本的平均吸光度值。
2）用吸光度值作為縱坐標（y），濃度值作為橫坐標（x），以每個標準品的吸光度值對其相應的濃度值進行標繪，作一標準曲線。
3）用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。
4）自動計算方法：在IFU上，它用四參數曲線已自動計算出結果。其它的歸納方法可能會得出稍微不同的結果。
5）人瘦素ELISA試劑盒樣品的濃度可直接從標準曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于zui高標準品的必須用進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應當把此稀釋因子考慮進去。