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熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG

2013年02月28日 14:08:29人氣:306來源:上海安研商貿(mào)有限公司

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關(guān) 鍵 詞熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG,熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG,Anti-VDA
【資料簡介】

熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG

Anti-VDAC/FITC  熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgG
Anti-CD14/Biotin  *化CD14抗體IgG
Anti-VEGF/FITC  熒光素標(biāo)記VEGF抗體IgG
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子抗體IgG
Anti-VEGF-A/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgG
Anti-VEGF-B/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子B抗體IgG
Anti-VEGF-C/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子C型抗體IgG
Anti-VEGF/RBITC  羅丹明標(biāo)記VEGF抗體IgG
Mouse Anti-human VEGF/FITC  熒光素標(biāo)記小鼠抗人VEGF單克隆抗體IgG
Anti-VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體IgG
Anti-VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgG
Anti-SV2A/FITC  熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG
Anti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC  熒光素標(biāo)記可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體(人)IgG
Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3IgG
Anti-HSP-70/RBITC  羅丹明標(biāo)記熱休克蛋白-70抗體IgG
Anti-VHL/FITC  熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制因子抗體IgG
Anti-Vimentin/FITC  熒光素標(biāo)記波形蛋白抗體IgG
Anti-VIP/FITC  熒光素標(biāo)記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgG
Anti-Visfatin-1/PBEF1(NT)/FITC  熒光素標(biāo)記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素/腹脂素/內(nèi)肥素 抗體IgG
Anti-Visfatin-1/PBEF1(NT) hu、 mo、 rat、MK /FITC  熒光素標(biāo)記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(N端抗體)IgG

SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳(SDSPAGE
根據(jù)要求配制好SDS-聚丙烯酸胺凝膠(一般釆用10%SDSPAGE
將已配制好的凝膠裝入電泳儀中(注意不要漏液)。
設(shè)計(jì)加樣順序,作好實(shí)驗(yàn)記錄,按預(yù)定順序加樣。一般裂解液我們按10-20ul/道點(diǎn)樣,重組蛋白按1-2ug/道點(diǎn)樣。
把電泳裝置與電源連接好,將電壓調(diào)至100V電泳10-20min,待溴酚藍(lán)遷移出積層膠位置再換用200V30-40min后關(guān)閉電源。
從電泳裝置上卸下凝膠玻璃板,用水沖洗干凈,準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜。

蛋白質(zhì)樣品(抗原)的制備:
  細(xì)胞的處理方法:向收集到的細(xì)胞中加入RIPA裂解緩沖液(三中蛋白酶抑制在使用前加入,終濃度為2ug/ml)在冰上裂解30—60min,然后再插入冰盒進(jìn)行超聲,超聲強(qiáng)度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn),超聲每次2-3秒,重復(fù)3-4次,再離心12000rpm3-5min,吸取上清備用。(超聲強(qiáng)度不能過大,防止蛋白碳化)
組織的處理方法:按實(shí)驗(yàn)要求將組織從動(dòng)物體內(nèi)取出(樣品不宜反復(fù)凍融),取少量(1-2g左右)放入玻璃勻槳器中研磨成勻漿,然后轉(zhuǎn)入EP管中進(jìn)行超聲,超聲強(qiáng)度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn),超聲每次5-7秒,重復(fù)5-6次,再離心12000rpm3-5min,吸取上清備用。
上述兩種方法得來的樣品處理液還要加入1/4體積左右的上樣Buffer,然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白變性,方可作為樣品點(diǎn)樣。(注意:在加熱組織裂解液時(shí),肝臟和腎臟組織要特別注意其本身濃度,是在制作裂解液時(shí)就適當(dāng)稀釋,否則加熱后會凝結(jié)成固態(tài)。還有些組織處理后很粘稠,有帶絲狀物,這是未裂解的核酸,可以適當(dāng)離心后再用。) 

 

上海安研商貿(mào)有限公司作者

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