*對外周血CD3 CD4 CD8 CD20 IL-2 INF-γ影響的研究

【資料簡介】

摘要：目的：觀察硬膜外麻醉下行腰間盤突出髓核摘除術(shù)病人外周血免疫相關(guān)因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量變化，探討*對淋巴免疫的影響，從而指導(dǎo)圍術(shù)期麻醉用藥及管理。方法：收集30例運用*進行硬膜外麻醉實施腰間盤突出髓核摘除術(shù)患者麻醉用藥前1h、術(shù)后24h及術(shù)后48h外周血，利用流式細(xì)胞儀測不同時相CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量。結(jié)果：術(shù)后患者CD3無明顯變化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。結(jié)論：運用*麻醉的術(shù)后患者T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞增多，細(xì)胞因子分泌增加，無明顯免疫抑制。

　　關(guān)鍵詞：*；免疫；麻醉

　　The Effects of Ropivacaine on the Content of CD3 CD4 CD8 CD20 IL-2 INF-γ

　　Abstract： Objective: To study the effect of ropivacaine on lymphocyte immunity. Method: 30 patients undergoing lumbar diskectomy suffer epidural anesthesia with ropivacaine. Venous blood samples were collected to measure the contents of CD3, CD4, CD8, CD20, IL-2, and INF-γ. Result： After operation, the contents of CD4, CD20, IL-2 and INF-γ were increased, that of CD3 was constant and that of CD8  was decreased. Conclusion： Ropivacatine has not marked influence on lymphocyte immunity.

　　Key words：Ropivacaine; Immunity; Anesthesia
                                                                                           
　　*是一種較新的長效酰胺類局麻藥［1］，目前主要用于硬膜外麻醉和手術(shù)鎮(zhèn)痛，運用范圍較廣。目前的研究表明麻醉藥物及疼痛應(yīng)激反應(yīng)對手術(shù)病人細(xì)胞免疫、體液免疫及細(xì)胞因子存在一定的影響［2］,而圍手術(shù)期患者免疫功能的狀態(tài)對術(shù)后病人的感染、腫瘤擴散及預(yù)后具有重大意義。本研究分析了運用*進行硬膜外麻醉實施腰間盤突出髓核摘除術(shù)前、術(shù)后病人外周血免疫相關(guān)因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量變化，為*更好的運用提供。

　　1 材料與方法

　　1.1 一般資料：擇期行實施腰間盤突出髓核摘除術(shù)病人30例,ASA I～II級，男22例，女8例，年齡18～48歲。

　　1.2 麻醉：病人于T12L1或L1～2硬膜外穿刺，成功后，向頭側(cè)置入導(dǎo)管3～4cm，注入0.75%*，麻醉平面控制在T10～5，術(shù)中監(jiān)測ECG、SpO2和BP。病人術(shù)中輸注林格液，未用止血藥物、代血漿或輸血，控制輸液量及輸液速度，維持血液動力學(xué)平穩(wěn)。

　　1.3 流式測定：分別于麻醉用藥前1h（T1）、術(shù)后24h（T2）和術(shù)后48h（T3）抽取靜脈血2ml，加入EDTA-2Na抗凝管中，24h內(nèi)進行流式細(xì)胞儀檢測。采用美國BD公司FACScan型流式細(xì)胞儀檢測，所用流式試劑為BD公司提供。CD3、CD4、CD8及CD20測定方法為：取200 μl 抗凝血，加相應(yīng)熒光標(biāo)記單抗20 μl，放置30 min，加紅細(xì)胞溶解液1 ml，待其透明后3 min離心（2000 r/min，4 min），棄去上清，熒光洗液（PBS＋0.1％NaN3疊氮鈉＋5％小牛血清）或Hanks液1ml洗2遍，0.5 ml洗液懸起，上機，測定。IL-2和INF-γ的測定方法為：淋巴細(xì)胞活化以后才分泌細(xì)胞因子且迅速分泌到細(xì)胞外。因此先利用刺激劑PMA體外激活淋巴細(xì)胞，然后用Monensin蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑阻止細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外，使細(xì)胞因子在細(xì)胞內(nèi)滯留到一定的量，再采用流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞內(nèi)抗原標(biāo)記進行檢測。

　　1.4 結(jié)果統(tǒng)計：計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計數(shù)資料應(yīng)用X2 檢驗，P＜0.05為有顯著性差異。

　　2 結(jié)果

　　術(shù)后患者CD3無明顯變化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。具體統(tǒng)計結(jié)果見表1、2。

　　表1 CD3、CD4、CD8含量變化表　略

　　表2 CD20、IL-2、INF-γ含量變化表　略

　　3 討論

　　手術(shù)期間，病人的免疫狀況受諸多因素影響，情緒焦慮、疼痛、麻醉、手術(shù)應(yīng)激和感染等因素都會影響病人的免疫狀況，引發(fā)不同組分淋巴細(xì)胞在外周血循環(huán)中的分布，改變細(xì)胞內(nèi)因子的分泌。目前有研究表明麻醉存在一定的免疫抑制作用，影響病人術(shù)后的恢復(fù)［3，4］。

　　T淋巴細(xì)胞是機體免疫的重要成分，T細(xì)胞與其他細(xì)胞及細(xì)胞因子間的相互作用共同完成免疫識別、活化及殺傷等功能，Th細(xì)胞可刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體并輔助其它T細(xì)胞完成免疫反應(yīng)。Ts細(xì)胞則具有免疫抑制的功能，Th與Ts細(xì)胞相互協(xié)調(diào)，保證體內(nèi)免疫功能的正常。B細(xì)胞介導(dǎo)機體內(nèi)體液免疫應(yīng)答，B 淋巴細(xì)胞與T 淋巴細(xì)胞相互作用并在Th2細(xì)胞輔助下被激活，細(xì)胞增殖，成熟并產(chǎn)生抗體，參與體液免疫應(yīng)答［5］。

　　白細(xì)胞介素2（IL-2）是機體內(nèi)重要的T細(xì)胞生長因子，是保障機體正常免疫功能的關(guān)鍵，具有多種生物學(xué)功能。如：能夠維持活性T細(xì)胞增生，誘生LAK細(xì)胞，促進B細(xì)胞分泌抗體，促進NK細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，能提高TH細(xì)胞數(shù)與功能來增強機體的免疫功能等. 與其他的細(xì)胞因子，如：sIL2R，IL-6，IL-1，IL-4，TNF等形成動態(tài)免疫調(diào)節(jié)，維持機體正常的免疫調(diào)節(jié)功能。

　　INF-γ是重要的生長負(fù)調(diào)節(jié)因子，兼有抗病毒復(fù)制，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)淋巴系統(tǒng)的功能，增強自身免疫力，INF-γ是主要的巨噬細(xì)胞活化因子（macrophage-activating factor，MAF），促進巨噬細(xì)胞吞噬能力和炎癥反應(yīng)，并可直接促進T、B細(xì)胞分化和CTL成熟，刺激B細(xì)胞分泌抗體，從而增強機體免疫機能。誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞生成NO的功能。在TNF與脂多糖的適宜刺激下，INF-γ可作為NO生成的合適誘導(dǎo)劑，對抑制腫瘤組織增殖與心血管重塑具有重要意義。同時INF-γ對維持機體自身免疫的穩(wěn)態(tài)具有作用。

　　在本研究中，術(shù)后病人CD4、CD20顯著升高，而CD8呈下降趨勢，具免疫抑制功能的Ts細(xì)胞濃度下降，Th細(xì)胞增多，B細(xì)胞增加，這表明患者的T細(xì)胞及B細(xì)胞反應(yīng)明顯增強， 同時還觀察到細(xì)胞因子IL-2和INF-γ呈逐漸上升的趨勢，這與CD4的變化是相符和的，表明病人體內(nèi)出現(xiàn)較多的Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，Th1細(xì)胞分泌大量的IL-2和INF-γ增強體內(nèi)的細(xì)胞免疫。通過本研究表明*對病人的T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞無明顯抑制作用。

　　［1］Concepeion M，Arthur GR，Steele SM，et al. A new local aneathetic, ropivacaine, its epidural effects in human［Ｊ］. Anesth Analg, 1990, 70: 80-85.

　　［2］焦志華，馬君志. 麻醉、手術(shù)對腫瘤患者細(xì)胞免疫的影響［Ｊ］. 國外醫(yī)學(xué)，麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊,2002,23：303-305.

　　［3］薛靜波,吳虹,魯迎年,等. 大腸癌患者手術(shù)前后外周血T 淋巴細(xì)胞亞群和血TNF 水平的檢測及意義［J］.肛腸病雜志,1999,19（6）: 12-13.

　　［4］侯建民,陳克能,王社軍,等. 全麻下經(jīng)胸食管癌切除前后病人外周血TNF、T 淋巴細(xì)胞及亞群的改變［J］.中華麻醉學(xué)雜志,1998,18（5）: 283-285.

　　［5］Suni MA, Ghanekar SA, Houck DW, et al. CD4 + CD8 low T lymphocytes exhibit enhanced cytokine expression, proliferation and cytotoxic activity in response to HCMV and HIV-1 antigens ［J］. Eur  Immunol, 2001, 31: 512-2520.