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人膀胱癌細胞

2012年12月21日 18:42:46人氣:566來源:上海安研商貿有限公司

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【資料簡介】

人膀胱癌細胞實驗步驟:在超凈臺內,安裝好濾器。

用去離子水溶解1640培養基,并用磁力攪拌器攪拌2 h,使之充分溶解。

在超凈臺內過濾。

分裝到250 mL的玻璃瓶內。

用封口膜封好,-20℃保存,過濾結束時,還要取少許培養基進行菌培,驗證培養基是否是無菌。

胎牛血清的處理

沒有滅活的血清中含有補體成分,需要將血清在56℃條件下滅活30 min。在水浴鍋內進行,滅活的過程中,要不停地搖晃,使受熱均勻,防止沉淀析出來。

人膀胱癌細胞[實驗步驟]

配制Hanks液,高壓滅菌,4℃保存。稱取*,在冰浴上進行研磨,并加入少量的D-Hanks液,使其呈糊狀,zui后用D-Hanks定容,過濾除菌。

分裝后,-20℃保存。

 

細胞傳代培養[實驗步驟]

1、準備工作:

1)肥皂洗手,在進行無菌操作前,用75% 的酒精擦拭雙手,注意指間,和指甲周圍。同時,用酒精棉球擦拭超凈臺。

2)將培養液放置室溫,備用。

3)打開超凈臺內的紫外燈,照射20 min。同時,將實驗所需材料也放入超凈臺進行滅菌(血清、培養基除外)

4)倒置顯微鏡下,觀察細胞的狀態,是否已經長滿培養瓶,需要進行分瓶。

 

2、關閉超凈臺的紫外燈,打開風機。

 

3、點燃酒精燈,取出刻度吸管,在火焰上略燒,然后,安上吸球待用。

 

4、在打開培養瓶之前,用酒精棉球擦拭瓶蓋,打開后,瓶口在酒精燈上過火焰,再用吸管輕輕吸出舊的培養液,注意,吸管不要碰到布滿細胞的培養瓶的側壁。

 

5、將*加入培養瓶內,顯微鏡下隨時觀察,見到細胞的突起消失,變圓時,立即翻轉培養瓶,吸出*。記住不要消化時間過長,否則,細胞會被*消化掉。

 

6、加入適量Hanks液或培養基清洗一遍,立即倒掉。

 

7、加入含有10%血清的培養基,用吹打管吹打,一定要輕輕吹打,使其從瓶壁上脫落分散到培養基中,再補加培養基,按1:3進行分瓶。

然后,用火焰燒培養瓶的瓶口和蓋,再蓋好培養瓶的蓋,放到培養箱中進行培養。

以上介紹的是貼壁細胞的傳代培養方法,對于懸浮細胞的傳代培養方法,只需要將細胞進行離心,1000 rpm,5 min,然后,換入新的培養基即可。

再分裝到不同的培養瓶中進行培養。

不健康的細胞質中有空泡,細胞內有顆粒樣物質,細胞間空隙增大,變形,不規則,失去原有的特點。

 

是否污染

傳代或換液24~ 48 h注意觀察細胞是否被污染,污染的細胞培養液變渾濁,鏡下可見有大量菌絲。如果細胞生長緩慢,生長特性改變,胞質內顆粒性物質增多,盡管培養液不變渾濁,考慮可能有支原體污染。污染的細胞立即從培養箱中取走,以免污染其它細胞。

人膀胱癌細胞

實驗四、

細胞凍存與復蘇[實驗步驟]

1. 為了保證細胞良好的狀態,在細胞凍存的前一天使細胞處于對數增長期,同時將細胞換液,次日,按照細胞傳代培養方法,用*消化貼壁細胞,將細胞用培養基沖下來,然后,用50 mL尖底離心管離心,1000 rpm,4min,棄上清,收集細胞。

2. 加入適量的凍存液(10% DMSO 和 90%含有20%血清的IMDM培養基)

3. 分裝到凍存管中,做好標記,標明細胞名稱,保存時間,所用培養基等。

4. 4℃放置30 min;-20℃放置1.5 h; -70℃放置12 h;zui后移到液氮罐中。

 

細胞的復蘇:細胞的復蘇原則是快速溶化,因為如果緩慢的溶化,會使進入細胞的水分形成冰晶,對細胞造成傷害,因此,在復蘇細胞時,將凍存細胞直接放到37℃的水浴中,使其迅速溶解。在超凈臺內將凍存管內的細胞懸浮液直接倒入小培養瓶或培養皿內,然后,加入3 mL的培養液。次日,觀察細胞生長情況,并更換細胞培養液。

上海安研商貿有限公司作者

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