現(xiàn)貨人分泌型免疫球蛋白AELISA 檢測試劑盒試驗(yàn)原理

【資料簡介】

 人分泌型免疫球蛋白AELISA 檢測試劑盒

上海信然生物技術(shù)有限公司專業(yè)供應(yīng)科研ELISA試劑盒,食品檢測試劑盒,放免試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,細(xì)胞株，提供免費(fèi)代測服務(wù)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí)性。我公司對(duì)試劑盒質(zhì)量100%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息，請(qǐng)：：謝
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試驗(yàn)原理：
　　　sIgA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知sIgA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將sIgA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中sIgA的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料：

蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

樣品收集、處理及保存方法：

血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 人分泌型免疫球蛋白AELISA 檢測試劑盒

操作注意事項(xiàng)：

試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

安全性：

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 人分泌型免疫球蛋白AELISA 檢測試劑盒

試劑盒性能：

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
操作步驟：

使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

 人分泌型免疫球蛋白AELISA 檢測試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的sIgA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的sIgA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
3、檢測值范圍：0-40umol/L
4、敏感度： 0.1 umol/L

HisX6/6His/His tag（CT） 聚組氨酸抗體/抗His tag標(biāo)簽抗體（C端 0.1ml
HisX6/6His/His tag（CT） 聚組氨酸抗體/抗His tag標(biāo)簽抗體（C端 0.2ml
FLAG Tag （NT） FLAG Tag標(biāo)簽抗體（N端） 0.1ml
FLAG Tag （NT） FLAG Tag標(biāo)簽抗體（N端） 0.2ml
FLAG Tag（CT） FLAG Tag標(biāo)簽抗體（C端 0.1ml
FLAG Tag（CT） FLAG Tag標(biāo)簽抗體（C端 0.2ml
Mink IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記水貂IgG 0.3ml
Rabbit IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔IgM 0.3ml
Rat IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記大鼠IgM 0.3ml
rHIL-1Ra/RBITC 羅丹明標(biāo)記重組人白介素-1受體拮抗劑 0.3ml
GST-Tag （glutathione-S-transferase） 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽蛋白抗體 0.1ml
GST-Tag （glutathione-S-transferase） 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽蛋白抗體 0.2ml
T7 tag（recombinant T7-tagged proteins polyclonal） polyclonal）T7 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
T7 tag（recombinant T7-tagged proteins polyclonal） polyclonal）T8 tag標(biāo)簽抗體 0.2ml
V5 tag（recombinant V5-tagged proteins polyclonal） V5 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
V5 tag（recombinant V5-tagged proteins polyclonal） V6 tag標(biāo)簽抗體 0.2ml
human Fibrinogen/RBITC 羅丹明標(biāo)記人纖維蛋白原 0.3ml
KLH/RBITC 羅丹明標(biāo)記血藍(lán)蛋白 0.3ml
OVA/RBITC 羅丹明標(biāo)記雞卵白蛋白 0.3ml
HSA（Human Serum albumin）/RBITC 羅丹明標(biāo)記人血白蛋白 0.3ml
KT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
KT3 tag KT4 tag標(biāo)簽抗體 0.2ml
VSV-G tag（vesicular stomatitis virus glycoprotein） VSV-G tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
VSV-G tag（vesicular stomatitis virus glycoprotein） VSV-G tag標(biāo)簽抗體 0.2ml
HIV gp120 艾滋病病毒抗體 0.1ml
HIV gp120 艾滋病病毒抗體 0.2ml
HIV gp41 艾滋病病毒抗體 0.2ml
Rabbit anti-pig IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗豬IgG（10nm/15nm） 1ml
Avidin/Gold 金標(biāo)記親合素（10nm/15nm） 0.1ml
Recomb Protein G/Gold 膠體金標(biāo)記重組蛋白G（10nm/15nm） 0.5ml
Recomb Protein G/Gold 膠體金標(biāo)記重組蛋白G（10nm/15nm） 2ml
HIV-1 ENV （gp160） antigen/envelope 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體 0.1ml
HIV-1 ENV （gp160） antigen/envelope 艾滋病病毒-包膜糖蛋白抗體 0.2ml
HLA-DR （human leukoyte Antigen DR） HLA-DR抗原抗體 0.1ml
HLA-DR （human leukoyte Antigen DR） HLA-DR抗原抗體 0.2ml
HLA-G （Human Leukocyte gen-G） 人類白細(xì)胞抗原G/組織相容性白細(xì)胞抗原G抗體 0.2ml
HLA-E （Human Leukocyte gen-E） 人類白細(xì)胞抗原E 0.2ml
Goat human Fibrinogen/RBITC 羅丹明標(biāo)記羊抗人纖維蛋白原 0.3ml
phospho-14-3-3 （Ser58）  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml
phospho-4EBP1（Ser64）  磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml