簡(jiǎn)單介紹細(xì)胞劃痕試驗(yàn)

【資料簡(jiǎn)介】

細(xì)胞劃痕法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至試驗(yàn)設(shè)定時(shí)間，觀察周邊細(xì)胞是否遷移至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力。試驗(yàn)通常需設(shè)定對(duì)照組和供試品組，通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同可以判斷供試品遷移與修復(fù)能力。

適用對(duì)象：包括加了某種處理因素、藥物、重組蛋白、外源性基因、生長(zhǎng)因子等供試品。

試驗(yàn)示例

1. 試驗(yàn)材料

2. 試驗(yàn)步驟

1）用marker筆比著直尺在6孔板背后每孔橫向和縱向各三等份劃線做記號(hào)，將細(xì)胞按照5×105cell/孔接種，加入10%CS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使形成單層細(xì)胞；

2）細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后用10μL槍頭比著直尺對(duì)準(zhǔn)孔板，輕推橫向、縱向劃線形成劃痕，用PBS漂洗細(xì)胞3次，去除劃掉的細(xì)胞；

3）在對(duì)照組和供試品組孔中分別加入2mL終濃度為0.5mg/mL的無血清培養(yǎng)基配制的人重組膠原蛋白和牛I型膠原蛋白，空白對(duì)照組只加入2mL無血清培養(yǎng)基；

4）轉(zhuǎn)移至37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，于0h、24h/48h、72h時(shí)，以橫向和縱向的交點(diǎn)為核心，在40倍顯微鏡下拍照；

5）每組3個(gè)重復(fù)孔，共27個(gè)數(shù)據(jù)；

3. 試驗(yàn)結(jié)果