禽白血病病毒抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 使用說明書

【資料簡(jiǎn)介】

【產(chǎn)品名稱】

通用名：禽白血病病毒抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Poultry Avian leukosis virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】禽白血病是由禽白血病病毒（Poultry Avian leukosis virus ，ALV）引起的能在禽類中導(dǎo)致不同致病型的腫瘤性疾病,能使大多數(shù)感染雞的生產(chǎn)性能下降,本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。

    本試劑盒適用于：禽血清抗原的檢測(cè)，以確定被檢禽是否感染禽白血病毒。

【原理】

本試劑盒由預(yù)包被禽白血病病毒抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)禽血清或血漿中禽白血病病毒抗原。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢血清，再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽白血病病毒抗原，則將與酶標(biāo)板上抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗原含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽白血病病毒。

【試劑盒組成】

序號(hào)	名稱	規(guī)格/96T×1
1	微孔酶標(biāo)板	96孔
2	陰性對(duì)照	0.3mL
3	陽性對(duì)照	0.3mL
4	樣本稀釋液	6mL
5	檢測(cè)抗體-HRP	10mL
6	20×洗滌緩沖液	25mL
7	底物A	6mL
8	底物B	6mL
9	終止液	6mL
10	封板膜	2張
11	說明書	1份
12	自封袋	1個(gè)
13	微孔酶標(biāo)板	96孔

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

 

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl；樣品孔每孔加入待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長處測(cè)定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.2，陽性對(duì)照≥0.8。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對(duì)照孔均值。

2.陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對(duì)照OD值+0.15，樣本OD值大于閾值，判定為陽性，反之，為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)血清或血漿中禽白血病病毒。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。