游離脂肪酸（free fattyacid，F(xiàn)FA）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

游離脂肪酸（free fattyacid，F(xiàn)FA）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
測(cè)定意義：
FFA既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類(lèi)代謝、糖代謝、內(nèi)分泌 功
能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。
測(cè)定原理：
在弱酸性條件下，F(xiàn)FA 與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游
離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。
自備儀器和用品： 研缽、臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度
計(jì)、1mL 玻璃比色皿。 試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。
樣品中 FFA 提取：
1、 血液：將所取血液，室溫靜置1 h 后，于4 ℃ 離心機(jī) 3500 rpm離心 15min，取上清0.1mL，
加 1.2mL 試劑一，震蕩提取 3h，8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測(cè)。
2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后稱(chēng)取約 0.1g 轉(zhuǎn)移至離
心管，按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：12 的比例加入試劑一，震蕩提取 3h，
8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測(cè)。
3、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1.2 的比例（建
議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1.2mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超
聲 2 秒，間隔 3 秒，總時(shí)間 3min）；震蕩提取3h，然后 8000rpm，4℃，離心 10min，取
上清待測(cè)。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 715 nm。
2. 對(duì)照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，調(diào)零。
3. 測(cè)定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，測(cè)定吸光值，記為 A。
記為 A 測(cè)定管。
FFA 含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R 2 =0.994
1. 血液中 FFA含量計(jì)算
FFA（μmol/L）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA含量計(jì)算
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
FFA（μmol/mg prot）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
FFA（μmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
FFA（μmol/10 4 cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)
= 0.16×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量
V 樣總：上清液總體積，1.2 mL；V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：加入樣本體積，1mL；
W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL