溫度敏感型 UNG 酶（TS-UNG）說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

溫度敏感型 UNG 酶（TS-UNG ）說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：EZ1140
規(guī)格： 100U
濃度：1U/μL
保存：保存于-20℃。并避免保存時(shí)反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
TS-UNG（Temperature Sensitive UNG）是經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)獲得的溫度敏感型 UNG 酶。
該酶能夠催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶，對(duì) RNA 無(wú)活性，主要應(yīng)用于 PCR
擴(kuò)增中防止產(chǎn)物污染。TS-UNG 酶與 E.coil 基因來(lái)源的常規(guī) UNG 酶相比，對(duì)溫度敏感、易于
滅活，避免了常規(guī) UNG 酶滅活后可能存在的殘留活性在常溫下對(duì)含 dUTP 擴(kuò)增產(chǎn)物的降解作
用。TS-UNG 酶可以在 20℃~37℃，5~10min 反應(yīng)，以消化含 dUTP 的模板；然后，在 50℃ 10min
或 95℃ 2min 進(jìn)行滅活。
利用 TS-UNG 酶低溫消化、易于滅活的特性，它可以很好地與 RT-PCR 擴(kuò)增反應(yīng)程序相
匹配，從而應(yīng)用于反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增防止產(chǎn)物污染。
活性定義：37℃條件下，1 小時(shí)降解 1μg 含 dU 堿基的單鏈 DNA 的酶量為 1 單位。
儲(chǔ)存緩沖液：
20mM Tris-HCl，100mM NaCl，0.1mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% glycerol，
pH 7.5 反應(yīng)條件：
1、反應(yīng)體系:
2、Incubate the product for 10min at 37℃；
3、Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min，or 95℃ for 2min；
Component Volume per Reaction（μL） Concentration in Master Mix
Template * < 1μg/reaction
Primer 1 1~5 0.2~1.0μM
Primer 2 1~5 0.2~1.0μM
d NTPs（dATP、dGTP、dCTP） * 200μM
d UTP (replace dTTP） * 400μM
10×PCR Buffer 5 1×
25mM MgCl 2 2~8 1.0~4.0mM
Taq（5U/μL） 0.25 1.25U
TS-UNG（1U/μL）
0.5
(0.1-0.5)
0.5U
(0.1~0.5U)
H 2 O * ——
Total volume 50μL
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質(zhì)量控制：
1、SDS-PAGE 電泳純度大于 98%；
2、降解活性、批間差異、穩(wěn)定性；
3、無(wú)核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性、RNase 酶活性；
注意事項(xiàng):
1、在 20℃~37℃范圍內(nèi)，TS-UNG 酶的活性隨溫度的升高有所增加，常用 20℃、25℃、37℃
進(jìn)行反應(yīng)，可對(duì)酶的用量（0.1~0.5U）及反應(yīng)時(shí)間（5~10min）進(jìn)行優(yōu)化；特別適合 RT- PCR 防
污染使用；
2、由于不同待擴(kuò)增基因?qū)?dUTP 的利用效率和對(duì) UNG 酶的敏感度不同，因此，如果采用 UNG
體系導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度下降，應(yīng)對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化；
3、避免多次凍融，切勿暴露在溫度波動(dòng)較大之處。溫度波動(dòng)對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性有較大影響；
4、擴(kuò)增前后要使用的區(qū)域和移液器，戴手套操作并經(jīng)常更換，PCR 反應(yīng)完成后切勿打開(kāi)
反應(yīng)管。以大限度的減少 PCR 產(chǎn)物對(duì)樣品的污染。