雞傳染性喉炎抗原酶聯免疫分析試劑盒技術參數

【資料簡介】

雞傳染性喉炎抗原酶聯免疫分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞傳染性喉炎抗原（ILT-Ag）表達。用純化的傳染性喉炎抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中傳染性喉炎抗原（ILT-Ag）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的傳染性喉炎抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中雞傳染性喉炎抗原（ILT-Ag）的存在與否。

試劑盒組成 
    30倍濃縮洗滌液    20ml×瓶    7    終止液    6ml×瓶
2    酶標試劑    6ml×瓶    8    陽性對照    0.5ml×瓶
3    酶標包被板    2孔×8條    9    陰性對照    0.5ml×瓶
4    樣品稀釋液    6ml×瓶    0    說明書    份
5    顯色劑A液    6ml×瓶        封板膜    2張  
6    顯色劑B液    6ml×/瓶    2    密封袋    個
標本要求 
．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
雞傳染性喉炎抗原酶聯免疫分析操作步驟
.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
0.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
雞傳染性喉炎抗原酶聯免疫分析試劑盒操作程序總結：

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥.00; 陰性對照平均值≤0.0
  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.5
  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為傳染性喉炎抗原（ILT-Ag）陰性
  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為傳染性喉炎抗原（ILT-Ag）陽性
。 
注意事項
．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
雞傳染性喉炎抗原酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期
．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月