谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒產(chǎn)品說明書

【資料簡(jiǎn)介】

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）試劑盒
分光光度法
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加5 mL 蒸餾水溶解。

產(chǎn)品說明：
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)
的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH 的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變
為親水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外
的目的。因此，GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因
為GST 具有GSH-Px 活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)
等的功能。注意，GST 催化的反應(yīng)減少GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。
GST 催化GSH 與CDNB 結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過測(cè)定340nm 波長(zhǎng)
處吸光度上升速率，即可計(jì)算出GST 活性。

自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入
1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500
萬細(xì)胞加入1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3 秒，間隔7 秒，總時(shí)間
3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。

二、測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。
3. 空白管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 試劑一，900μL 試劑二和100μL 試劑三，迅速混勻后
于340nm 測(cè)定吸光度變化，記錄10 s 和310 s 吸光度為A1 和A2。
4. 測(cè)定管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 上清液，900μL 試劑二和100μL 試劑三，迅速混勻后
于340nm 測(cè)定吸光度變化，記錄10 s 和310 s 吸光度為A3 和A4。

注意：空白管只需測(cè)定一次。

1. 樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力；
2. 細(xì)胞中GST 活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在300 萬-500 萬之間，細(xì)胞中GST 的提取時(shí)可加試劑一
后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞；
3. 本法測(cè)定GST 活性的線性范圍可達(dá)76 μmol/min /L，測(cè)定前先用1～2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如5min
內(nèi)反應(yīng)不成線性，須對(duì)樣品用蒸餾水稀釋，計(jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；
4. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，請(qǐng)控制在25℃或者37℃（哺乳動(dòng)物）。