上海源葉生物科技有限公司作者
1.標記物在RIA中為核素標記抗原,在IRMA中為核素標記抗體。抗原有不同種類,根據其化學結構,標記時需用不同的核素和不同的方法。抗體為蛋白質,有利于碘化標記,不同抗體標記方法基本相同。標記抗體的比活度高,提高了分析的靈敏度。
2.反應速率、反應速度與反應物的濃度成正比,在IRMA中標記抗體是過量的,而且不存在競爭性結合的復雜反應,所以反應速度較RIA快。在RIA中抗體量是微量的,所以一定要用高親和力的多克隆抗體,而在IRMA中應用親和力較低的單克隆抗體也能得到滿意的結果。
3.反應模式RIA為競爭抑制,測得放射性的量與受檢抗原成反比。IRMA為非競爭結合,劑量與反應曲線為正相關的直線關系。
4.特異性在單位點IRMA中,一般均應用針對不同位點的單克隆抗體,其交叉反應率低于應用多克隆抗體的RIA。
5.標準曲線的工作濃度通常RIA的工作范圍為2—3個數量級,而IRMA可達3個數量級以上。
6.分析誤差RIA中加入的抗體和標記抗原都是定量的,加樣品誤差可嚴重影響測定結果。IRMA中標記和固相抗體在反應中都是過量的,只有受檢標本的加樣誤差才會影響分析結果。因此,IRMA的批內和批間變異均比較小。
7.其他RIA可以測定大分子量與小分子量的物質,雙位點IRMA只能測定在分子上具有2個以上抗原表位的物質。
在RIA中應用的多為多克隆抗體,親和力和特異性要求較高,但用量很少。IRMA中標記抗體和固相抗體用量較多,一般均用來源豐富、特異性較高的單克隆抗體。
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