真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

　　該操作以Invitrogen 公司的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 LipofectAMINE為例,其它轉(zhuǎn)染 試劑可參照各自的使用說(shuō)明書進(jìn)行。

1.   在 6 孔板中接種 1-3×105 細(xì)胞/ 孔，加入 2ml *培養(yǎng)基，置CO2 孵箱中 37℃

培養(yǎng)過(guò)夜。

2.   待細(xì)胞長(zhǎng)到 50-80%單層時(shí)，在無(wú)菌離心管中配制如下溶液：

溶液 A：將 1-2μg待轉(zhuǎn)染的超純 DNA 稀釋到 100μl 無(wú)血清培養(yǎng)基中

溶液 B：將 2-25μl  LipofectAMIN E 稀釋到 100μl 無(wú)血清培養(yǎng)基中

3.   混合溶液 A 和 B，輕輕混勻，室溫放置 15-45min。

4.   用 2ml 無(wú)血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細(xì)胞，加入 0.8ml 無(wú)血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體 復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。

5.   用*培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6.   24-72hr 后檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達(dá)株。