進口ELISA試劑盒幾個世紀以來,人們一直使用含金藥物來治療一些病癥如類風濕關節(jié)炎。此外,這些含金藥物可能對抗癌和抗HIV有效。這些含金藥物起作用時會發(fā)生一種機理,因為金離子會迫使脫離鋅指的鋅離子與結合蛋白結構域的核酸成環(huán)。美國研究人員已經用離子遷移質譜表征了這種“金手指”并確定了的金結合位點。
盡管金屬離子有多種潛在的結合位點,但每種金屬蛋白通常喜歡單一構象。以前在構象異構體混合物中特異性結合位點的位置不可能確定。 現在Farrell和他的團隊仔細檢查了兩個金手指并用一種特殊分析方法TWIM-MS(travelling-wave ion mobility mass spectrometry)對其進行了表征。根據表征結果分析可知,取代Sp轉錄因子鋅指3中的鋅僅導致產生一種金手指,研究人員認為這種金手指具有線性Cys-Au-His鍵;以HIV核衣殼蛋白為例,核衣殼蛋白在病毒復制中起關鍵作用,將金置于蛋白質(NCp7-F2)的鋅指2中,進口ELISA試劑盒導致產生了三種不同的帶有線性ys-Au -Cys圖案的金手指,顯然其中之一占主導地位。
研究人員的成功源于使用了TWIM-MS(travelling-wave ion mobility mass spectrometry)的分析方法。這種分析方法的原理是:待分析的分子被電離,離子通過氣體中的電場加速,與氣體分子的碰撞會導致離子速度減慢,大體積分子的速度比小型緊湊型分子的速度更慢,因為小型緊湊型分子碰撞更頻繁,這使得區(qū)分和分離異構體成為可能,因為盡管異構體具有相同的質量,但它們不同的幾何形狀導致不同的遷移率,一旦根據其遷移率分離,那么現在各個離子就可以通過碰撞誘導解離(CID)成碎片,并通過質譜再次測量碎片。這種分析方法可以用來表征與金結合的較短肽。
Farrell說:“通過TWIM-MS,我們能夠確定金修飾的鋅指NCp7-F2和Sp-F3的具體結合位點和模式,因此離子遷移率質譜提供了關于鋅指蛋白中鋅交換引起的幾何變化的重要信息,以及這些反應的選擇性和反應性,進口ELISA試劑盒這可能有利于尋找新的金屬基抗病毒和抗腫瘤藥物。”