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ELISA試劑盒的包被方式

時間:2016-4-21閱讀:386
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   有多少人使用elisa試劑盒操作實驗呢?關于elisa試劑盒您又了解關少呢?您知道elisa試劑盒的包被形式嗎?今天呢上海恒遠生物將為您解說的就是elisa試劑盒的包被形式,elisa實驗的靈敏度較高、特異性也比較好,然而因此特點在臨床上得到了較為廣泛的應用,操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,就很有可能會導致顯色不全、花板等結果。廢話不多說,我們將重點放在elisa試劑盒的包被形式上,請您耐心閱讀!

   我們將抗原或抗體固定在過程稱為包被。換句話來說,包被就是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。

   蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。

   載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。

   蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少,僅為直接包被的/0乃至于/00。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射2小時),以增加其吸附性能。

   固相載體先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素系統作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。

   而脂類物質無法與固相載體結合,可將其在有機溶劑中,比如乙醇,溶解后加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹干,待酒精揮發后,讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

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