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人晚期氧化蛋白產物(AOPP)elisa試劑盒使用說明書

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人晚期氧化蛋白產物(AOPP)elisa試劑盒工作原理
本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),測定樣品中人晚期氧化蛋白產物(AOPP)的水平。向預先包被人晚期氧化蛋白產物(AOPP)抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的晚期氧化蛋白產物(AOPP)抗體,經過溫育和洗滌,去除未結合的組分,然后再加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人晚期氧化蛋白產物(AOPP)的濃度呈正相關。
注意事項
. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
3. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
5. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
人晚期氧化蛋白產物(AOPP)elisa試劑盒洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
操作程序
. 分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
4. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
5. 測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
6. 人晚期氧化蛋白產物(AOPP)elisa試劑盒根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。

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