細胞培養(yǎng)基的形態(tài)分類及污染消除
體外培養(yǎng)基細胞根據(jù)它們在培養(yǎng)器皿是否能貼附于支持物上生長特征,可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養(yǎng)時能貼附在支技物表面生長。如羊水細胞為貼附型細胞,常表現(xiàn)為成纖維型細胞和上皮細胞生長。懸浮型細胞在培養(yǎng)中懸浮生長。
、成纖維型細胞
在培養(yǎng)中的細胞凡形態(tài)與成纖維細胞類似時,皆可稱之為成纖維細胞。本型細胞由形態(tài)與體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)相似而得名,細胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長,細胞有卵園形核,胞質(zhì)向外伸出2-3厘米個長短不同的突起,除真正的成纖維細胞外,凡由中胚層間質(zhì)起源的組織細胞常呈本類形態(tài)生長。
2、上皮型細胞
此類型細胞在培養(yǎng)基器皿支持物上生長具有扁平不規(guī)則多角形特征,細胞有園形核,細胞緊密相連單層膜樣生長。起源于內(nèi)、外胚層細胞如皮膚、表皮衍生物、消化管上皮等組織細胞培養(yǎng)時,皆呈上皮型形態(tài)生長。
3、游走型細胞
本型細胞在支持物上散在生長,一般不連成片。細胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起,呈活躍的游走或變形運動,速度快且不規(guī)則。此型細胞不很穩(wěn)定,有時亦難和其它型細胞區(qū)別。在一定的條件下,由于細胞密度增大聯(lián)成片后,可呈類似多角型或成纖維細膩包形態(tài)。常見于羊水細胞培養(yǎng)的早期。
當重要的培養(yǎng)基污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。
)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)基瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,下列濃度,0.25,0.50,.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6)重復步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。