有關細胞和組織學技術

免疫組織化學技術是用標記物或顯色物標記的抗體檢測細胞和組織內的抗原，從而達到診斷和研究疾病的目的。抗原的準確顯示和定位與制備的細胞和組織標本質量的好壞有著密切的。由于各種抗原的生化、物理性質不同，如溫度高低、酸堿度強弱及各種化學試劑的作用均可影響抗原的免疫學活性，良好的細胞和組織學結構將有助于抗原的準確定位。因此，細胞和組織標本的采集制備在免疫組織化學技術中占有十分重要的位置。

　　（一）細胞標本的取材

　　目前，免疫組化技術已經應用于細胞學診斷，如鑒別低分化癌與惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應用于胸腹水中間皮瘤與癌的鑒別。McAb應用于淋巴白血病和惡性淋巴瘤的分類分型。近年來，培養(yǎng)細胞的免疫組化技術在鑒定細胞的種類、分化程度、表面抗原特點以及腫瘤結構成分改變等方面的研究均起到了積極作用。

　　細胞標本的取材有以下3種方法:

　　．印片法　　主要應用于活組織檢查標本和手術切除標本。新鮮標本以zui大面積剖開，充分暴露病變區(qū)，將載玻片輕輕壓于病變區(qū)，脫落的細胞便粘附在玻片上，立即浸入細胞固定液內5-0min，取出后自然干燥，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

　　優(yōu)點是簡便省時，細胞抗原保存較好。缺點是細胞分布不均勻，玻片上細胞重疊，影響標記效果。

　　2．穿刺吸取涂片法　　主要應用于實質器官的病變區(qū)，如肝、腎、肺、淋巴結、軟組織等。用細針穿刺吸取病變區(qū)內液體成分，如穿刺液較少，可直接涂抹在載玻片上，力求細胞分布均勻。如穿刺液較多，細胞豐富，可用洗滌法：將穿刺液滴入盛有-2ml Hanks液（RPMi 640液）的試管內，輕輕攪拌，以500rpm低速離心5-0min后，棄上清液，將沉淀制成細胞懸液（濃度約2×06細胞/ml），吸取滴于載玻片上，輕輕涂抹，待涂片略干即可固定。

　　該法穿刺吸取直接涂片的優(yōu)點是操作簡便，細胞形態(tài)保持較好。缺點是細胞分布不均勻。洗涂法片雖可彌補這一缺點，但操作復雜，細胞常常發(fā)生變形。

　　3．體液沉淀涂片法　　主要用于胸水、腹水、尿液、腦脊液等體液多、細胞少的標本。體液采取后，必須及時處理，更不宜加固定液。根據標本內細胞數量的多少選用不同的處理方法：①細胞數量極多者，可吸取少量液體直接涂在玻片上。②細胞數量較少者，可將液體自然沉淀，然后吸取5ml左右沉淀液，以500rpm離心0min，棄上清液，將沉淀涂片，略干后固定備用。

　　如用細胞離心涂片器（Cytospin ），可將標本用上述離心沉淀法制成2×06細胞/ml的細胞懸液，吸取50μl加入涂片器內，離心后即制成分布均勻的細胞涂片，細胞分布在直徑約6mm的小圓圈內，每個圓圈內的細胞數約05個（Danos,976）。

　　培養(yǎng)細胞標本的取材可根據培養(yǎng)的細胞特性分別采取不同的方法。某些細胞有貼壁生長的特性，如纖維母細胞、粘液癌細胞等，只需將載玻片或蓋玻片插入培養(yǎng)液內即可收集到理想的細胞標本。某些細胞只能在培養(yǎng)液中生長，可用上述體液沉淀離心涂片法處理。

　　制備細胞涂片應注意：①標本反復離心洗滌，細胞的粘附性降低，在免疫組化染色過程中容易脫片，因此，在制備涂片前載玻片上應涂粘附劑。②為節(jié)　省試劑和便于鏡下觀察和記數，應將細胞集中到直徑0.6-.0cm的圓圈內，細胞總數以05個為宜。③粘液豐富的標本，如痰液，胃液等，未經特殊處理，一般不宜作免疫組化標記。

　　（二）組織標本的取材

　　組織標本主要取之于活組織檢查標本、手術切除標本、動物模型標本以及尸體解剖標本等。前三者均為新鮮組織，后者是機體死亡2h以上的組織，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有變性消失，嚴重彌散現象，因此，尸檢組織應盡快固定處理，以免影響免疫組化標記效果。但有些較穩(wěn)定性抗原，如HBsAg、HBcAg等在尸檢標本中，抗原顯示仍較好。

　　組織標本的取材常常受到各種因素的影響，如各種內窺鏡鉗取的組織，常因過度擠壓而變形，嚴重者組織結構被破壞。大組織標本病變分布廣泛，抗原在組織中分布不均一，常出現人為的組織取材不準確。為了避免上述缺點，組織取材時應注意：①活檢鉗的刃口必須鋒利，以免組織受擠壓；②取材部位必須是主要病變區(qū)；③必須取病灶與正常組織交界區(qū)；④必要時取遠距病灶區(qū)的正常組織作對照。

　　為充分保存組織的抗原性，標本離體后慶立即作處理，或立即速凍成凍塊進行冰凍切片，或立即用固定液固定進行脫水、浸蠟、包埋、石蠟切片。如不能迅速制片，可貯存于液氮罐內或-70。C冰箱內備用。

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