細胞分裂指數測定

時間：2014/11/21閱讀：702

一、原理

體外培養細胞生長、分裂繁殖的能力，可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的，如隨著分裂指數的不斷提高，細胞也就進入了指數生。

分裂指數指細胞群體中分裂細胞所占的百分比，它是測定細胞周期的一個重要指標，也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器與用品：CO2培養箱、普通顯微鏡、細胞培養血、蓋玻片、吸管

2、試劑：培養液、、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液

三、操作步驟

1、消化細胞，將細胞懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。

2、CO2培養箱中培養48小時，使細胞長在蓋片上。

3、取出蓋片，按下列順序操作：

PBS漂洗3分鐘→甲醇：冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。

4、蓋片晾干后反扣在載玻片上，鏡檢。

5、計算：

分裂指數=分裂細胞數/總細胞數×

四、注意事項

操作時動作要輕，以免使蓋片上的細胞脫落。

附：Giemsa染液配制：

稱Giemsa粉末0.5克，加幾滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油總量為33ml）。56℃中保溫90-120分鐘。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存，此為Giemsa原液。

使用時按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。

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