一、人成骨肉瘤MG-63細胞株和成人成骨細胞的培養與分化特性的觀察

目的：觀察人成骨肉瘤MG-63細胞株和正常成人成骨細胞分化的特性。方法：在細胞培養的不同時間，用α-磷酸奈酚法測定堿性磷酸酶（ALP）活性；放射免疫法測定骨鈣素（BGP）含量；半定量逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）測I型膠原、MMP-1、TIMP-1基因mRNA表達；Van GieSon氏苦味酸酸性復紅染色法染色細胞I型膠原。結果：人成骨肉瘤MG-63細胞株接種培養第7天后I型膠原基因表達較高。MMP-1表達量隨時間推移逐漸增加，至第24天達到高峰。第1~9天TIMP-1 表達量逐漸增加，其后基本恒定。0~12天ALP活性逐漸增高，致12天達zui高，其后逐漸下降。18天后，細胞有許多大小不等的結節形成，I型膠原結節染色較無結節處深。正常成人成骨細胞（hOB）接種培養后0~6天細胞逐漸匯片。0~12天ALP活性逐漸增高，致12天達zui高，其后逐漸下降。第6天BGP表達zui高，其后逐漸下降。結論：分離培養的hOB具有成骨細胞的特性；人成骨肉瘤MG-63細胞株為具有人成骨細胞表型特征的成骨細胞模型。人成骨肉瘤MG-63細胞株和hOB的生長分為細胞增殖、骨基質成熟、骨基質礦化階段，且I型膠原、BGP、MMP-1、TIMP-1基因表達及ALP活性呈時間特異性。

二、人成骨肉瘤MG-63細胞株和成人成骨細胞基質金屬蛋白酶及其抑制因子的表達

目的：觀察人成骨肉瘤MG-63細胞株和正常成人成骨細胞（hOB）基質金屬蛋白酶（MMPs）和基質金屬蛋白酶抑制因子（TIMPs）表達的類型。方法：MMPs和TIMPs mRNA表達用RT-PCR檢測。結果：人成骨肉瘤MG-63細胞株和hOB均表達MMP-1、MMP-2、MMP-7、MMP-10、MMP-11、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3。人成骨肉瘤MG-63細胞株可表達MMP-12，hOB則無。結論：人成骨肉瘤MG-63細胞株和hOB表達的MMPs和TIMPs類型基本相似，人成骨肉瘤MG-63細胞株可以作為具有人成骨細胞表型特征的成骨細胞模型來研究MMPs和TIMPs的表達與調控。

三、雌二醇對人成骨肉瘤MG-63細胞株和成人成骨細胞基質金屬蛋白酶及其抑制因子的作用

目的：探討雌二醇（17β-estradiol，E2）對人成骨肉瘤MG-63細胞株和正常成人成骨細胞（hOB）基質金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制因子（TIMPs）的作用和雌激素缺乏致骨質疏松的發病機制。方法：MMPs和TIMPs蛋白質表達用ELISA和Western Blot檢測， mRNA用RT-PCR檢測。MMPs活性用明膠酶譜法檢測。結果：發現E2抑制人成骨肉瘤MG-63細胞株MMP-1 mRNA和蛋白質表達，并且呈劑量依賴關系；10-8M E2抑制hOB MMP-1蛋白質表達；E2對人成骨肉瘤MG-63細胞株MMP-2及TIMP-1 mRNA及蛋白質表達無影響；E2對hOB MMP-2及TIMP-1 蛋白質表達無影響；E2對人成骨肉瘤MG-63細胞株和hOB MMP-2活性亦無影響。結論：雌激素不足可導致其對人成骨樣細胞MMP-1的抑制作用減弱，促進骨吸收和骨基質分解，此可能為雌激素缺乏致骨質疏松的重要發病機制。

四、雌二醇對人成骨肉瘤MG-63細胞株和成人成骨細胞膜型 基質金屬蛋白酶-1的影響

目的：膜型基質金屬蛋白酶-1（membrane type 1-matrix metalloproteinase, MT1-MMP）是zui近發現的一種可由多種細胞表達的基質金屬蛋白酶。為探討雌二醇（E2）對人成骨肉瘤MG-63細胞株和正常成人成骨細胞（hOB）膜型基質金屬蛋白酶（MT1-MMP）的作用和絕經后骨質疏松癥（OP）的作用機制。方法  Northern雜交、Western雜交和激光共聚焦顯微系統免疫熒光法分別檢測MT1-MMP mRNA和蛋白質表達。MMP-2活性用明膠酶譜和酶聯免疫吸附測定檢測。結果  觀察到E2促進MG-63細胞MT1-MMPmRNA表達，并呈劑量依賴關系。E2促進MG-63細胞MT1-MMP蛋白質表達，并呈劑量依賴關系；E2干預24~48小時促進MG-63細胞MT1-MMP蛋白質表達；激光共聚焦顯微系統免疫熒光法證實E2促進MT1-MMP蛋白質表達增強，MT1-MMP蛋白質表達于細胞膜和細胞質中。E2對MG-63細胞MMP-2活性無影響。結論  E2可促進MG-63細胞MT1-MMP表達。雌激素不足可減少成骨樣細胞MT1-MMP表達，此可能為絕經后OP的骨吸收增強機理之一。