學(xué)習(xí)植物根尖壓片方法的基本技術(shù)。熟悉細胞有絲分裂各個時期的形態(tài)特征及染色體的變化,并學(xué)會染色體簡易*片的制片技術(shù)。
二、實驗原理
有絲分裂是體細胞分裂的主要方式,一般發(fā)生在植物根尖或莖尖的分生組織中。在有絲分裂時,細胞核與細胞質(zhì)有很大的變化,但以細胞核內(nèi)染色體的變化zui為明顯,而且是有規(guī)律地進行。各種生物染色體在數(shù)目上和形態(tài)上是相對恒定的,并隨科屬種的不同而具有一定的特征。洋蔥體細胞中有8對共16條染色體,在有絲分裂過程中,每個染色體能復(fù)制一份,然后分配到兩個子細胞中,所以兩個子細胞與母細胞所含的染色體在數(shù)目、形態(tài)和性質(zhì)上都是相同的。在細胞遺傳學(xué)研究中,人們常常需要了解某一物種的染色體數(shù)目,而zui有效的方法就是觀察細胞有絲分裂的中期,這樣能得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果。
三、實驗材料
洋蔥(Aillum cepa)根尖
蠶豆(Vicia faba)根尖
四、實驗器具和藥品試劑
顯微鏡、培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、溫度計、鑷子、解剖針、刀片、載玻片、蓋玻片、燒杯、量筒、滴瓶、切片架、切片盒、凹面玻片、瓶、大培養(yǎng)皿、紗布、吸水紙、鉛筆、吸管。
卡諾氏固定液(甲醇或95%乙醇3份,冰醋酸1份)、改良品紅染色液(見附錄:實驗試劑的配制)、0.002M8-羥基喹啉水溶液、0.05—0.2%秋水仙素溶液、對二氯苯飽和水溶液、1N HCl、95%乙醇、正丁醇、加拿大樹膠。
五、實驗方法和步驟
(一)材料準(zhǔn)備 選取蠶豆(或小麥、玉米等)種子放在燒杯中,放清水浸泡過夜,使種子吸水脹大后倒出,再用清水洗幾次,用多層紗布包好種子,放進20~25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。當(dāng)根尖長1~3cm 時,即可以進行預(yù)處理。
(二)預(yù)處理 為了有利于對有絲分裂中染色體的觀察和計數(shù),在固定之前應(yīng)用理化因素進行預(yù)處理,這樣可以改變細胞質(zhì)的粘度,抑制或破壞紡錘絲的形成,促使染色體縮短和分散等。一般是在分裂高峰前處理1.5小時以上。處理的方法如下: