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上海士鋒生物科技有限公司
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士鋒生物天然免疫功能實驗測定

時間:2013/11/25閱讀:754
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天然免疫是特異性免疫的基礎,并參與和影響特異性免疫,因此檢測機體天然免疫功能的狀態,是評價機體免疫功能的重要組成部分。
一、中性粒細胞吞噬功能檢測
中性粒細胞吞噬細菌的現象稱為小吞噬現象,可以通過體外實驗觀察其吞噬細菌的情況并測定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小時肉湯培養物、抗凝人血、小試管、玻片、吸管、毛細吸管、瑞氏染色液。
【方法】
1、用酒精棉球消毒耳垂后,取血4滴(約0.2ml),收集于肝素(50u/ml)抗凝管中,混勻。
2、加入白色葡萄球菌18小時肉湯培養物2滴(約0.1ml,12億菌/ml)。
3、充分混勻,置37℃孵育10分鐘后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于潔凈的載玻片上,推成薄血片,空氣中自然干燥。
5、瑞氏染色:瑞氏染液數滴覆蓋血膜,染1分鐘,再加等量pH6.8 PBS與染液混合,染10~15分鐘,注意勿使染液干涸。用蒸餾水沖洗,沖洗時平持玻片,在一端加水,使染料“漂”走。空氣中自然干燥或濾紙印干。
6、油鏡觀察,可見中性粒細胞吞噬葡萄球菌。如染色正確,可見細胞核及被吞噬細菌染成紫色,而中性粒細胞的細胞漿則為淡紅色。
【結果】觀察100個中性粒細胞,分別記錄吞噬細菌的中性粒細胞數和每個中性粒細胞吞入的細菌數。計算公式為:

二、巨噬細胞吞噬功能檢測
巨噬細胞吞噬異物的現象又稱為大吞噬現象。此試驗通過檢測巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬作用,了解巨噬細胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、滅菌肉湯培養基、1%雞紅細胞懸液、Hanks液、肝素、瑞氏染液。
【方法】
1、試驗前一天,于小白鼠腹腔內注射滅菌肉湯培養基1ml。
2、試驗當天,小白鼠腹腔內注入1%雞紅細胞懸液1ml,輕揉腹部,使雞紅細胞分散。
3、30分鐘后,腹腔內注入Hanks液2ml,輕揉腹部,然后吸取腹腔液注入盛有1ml Hanks液(內含肝素10單位)試管中,37℃靜置30分鐘,1500轉/分,離心10分鐘。
4、取沉淀物作涂片,自然干燥,瑞氏染色,鏡檢。
【結果】
1、吞噬率(%):指每100個巨噬細胞中吞有雞紅細胞的巨噬細胞數。
2、吞噬指數:100個巨噬細胞吞噬的雞紅細胞總數除以100,即得吞噬指數,即每個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數。
計算公式同上。
【附錄】
1、瑞氏染液配制:
稱取瑞氏染料0.1克,研磨于60ml甲醇中,過濾,貯褐色瓶中備用。
2、雞紅細胞懸液的制備:
用注射器由雞心內取血數毫升,加于含枸椽酸鈉溶液的試管中,搖勻,離心沉淀,沉淀的紅細胞用Hanks液洗滌三次,配成1%濃度即成。

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