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培養(yǎng)基
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細(xì)胞自發(fā)轉(zhuǎn)化的若干問題與解決方案

時間:2013/10/17閱讀:715
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1. 什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)化?何時會發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化?

細(xì)胞轉(zhuǎn)化是細(xì)胞發(fā)生遺傳性狀改變的一種變化,它的基礎(chǔ)是DNA或基因的突變。從屬性上說,基因突變導(dǎo)致生物體發(fā)生的轉(zhuǎn)化,有利于生物體的轉(zhuǎn)化,也有不利于生物體的轉(zhuǎn)化(例如癌變)。

在體外培養(yǎng)的細(xì)胞,受到致突變作用時便可發(fā)生轉(zhuǎn)化,凡能誘發(fā)DNA(基因)結(jié)構(gòu)改變的因素均視為誘發(fā)因素,有物理因素(如射線)、化學(xué)因素(MNNG)、病毒(EBV、SV40)、癌基因也是,但需要借助載體和輔助因素。

在未施加任何誘變因素處理的情況下,細(xì)胞自發(fā)出現(xiàn)的轉(zhuǎn)化就是SPONTENOUS TRANSFORMATION。當(dāng)對細(xì)胞進(jìn)行并存或者反復(fù)傳代時,在一些難以控制的因素影響下,即可發(fā)生,如血清質(zhì)量下降、病毒污染、溫度和pH值波動以及細(xì)胞對外界環(huán)境敏感。

2. 自發(fā)轉(zhuǎn)化有無向某種細(xì)胞進(jìn)行特異轉(zhuǎn)化的性質(zhì)?這期間有無特殊規(guī)律?

自發(fā)轉(zhuǎn)化是一種原因不明的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,與人工誘發(fā)體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化不同,它并無特異的轉(zhuǎn)化趨向。說到規(guī)律, 自發(fā)轉(zhuǎn)化的一般表現(xiàn)就是核型異倍化、獲得永生性、接觸抑制消失等,轉(zhuǎn)化細(xì)胞形態(tài)上變得肥大,有向三維空間生長的趨勢,容易Piled up。細(xì)胞生長匯合后并不發(fā)生接觸抑制,而是繼續(xù)分裂增殖,就像癌變(實際是一種惡性轉(zhuǎn)化)。其轉(zhuǎn)化的基本過程還是一樣的,誘發(fā)(initiation)--DNA損傷與修復(fù)--發(fā)展和表現(xiàn)(expression)。

3. 自發(fā)性轉(zhuǎn)化的鑒定要采取那些檢測手段?

至于轉(zhuǎn)化的準(zhǔn)確界定:Focus也就是轉(zhuǎn)化灶可以被分離培養(yǎng),能形成傳代細(xì)胞系,可用于進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)性狀的檢測。細(xì)胞培養(yǎng)中正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞之間性狀的差別有很多鑒定指標(biāo),一般應(yīng)做以下的實驗分析:

(1)一般性狀(形態(tài)、生長曲線、倍增時間)

(2)遺傳學(xué)特性(染色體標(biāo)記分析等)

(3)惡性測試試驗,浸潤性生長、分化性、粘附性(整合蛋白表達(dá))、對血清要求等,對了,還有凝集試驗(凝集素反應(yīng))

其中zui后一項可以說明轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞是否為惡性轉(zhuǎn)化。

4. 怎么區(qū)分細(xì)胞形態(tài)的改變是自發(fā)性轉(zhuǎn)化抑或其他因素引起的一般形態(tài)改變?

細(xì)胞形態(tài)改變時是自發(fā)轉(zhuǎn)化還是一般性改變,這就需要從如上所述的轉(zhuǎn)化表現(xiàn)進(jìn)行判斷了。但是對于不做遺傳而僅是培養(yǎng)自己所需細(xì)胞的研究人員來說,簡單的判定就是,只要細(xì)胞形態(tài)生長的讓你無法接受,就是spontenous transformation,其他未知因素引起細(xì)胞形態(tài)廣泛改變的機制也是DNA或是基因突變的結(jié)果,只是expression的程度不同罷了。

5. 自發(fā)性轉(zhuǎn)化是不是不可逆的?它的發(fā)生是一猝而就,還是經(jīng)過數(shù)代細(xì)胞突變的累積而致?是否遺傳?

先回答第二個小問題:在一個受轉(zhuǎn)化因素作用的細(xì)胞群中,不是所有的細(xì)胞都一定受到損害,受到影響并發(fā)生轉(zhuǎn)化啟動進(jìn)入發(fā)展階段的細(xì)胞可能只是一小部分,散在于那些未受損的正常細(xì)胞之間,大約經(jīng)過13個細(xì)胞周期的增殖,整個細(xì)胞群匯合成片,正常細(xì)胞發(fā)生接觸抑制,但轉(zhuǎn)化細(xì)胞卻不斷進(jìn)展,從而表現(xiàn)出轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。由此來看,它的發(fā)生是由細(xì)胞個體量變積累到發(fā)生質(zhì)變的過程,不是一蹴而就。

因此,若是在早期及時去除轉(zhuǎn)化細(xì)胞或轉(zhuǎn)化灶,使正常細(xì)胞不受影響的話,spontenous transformation can be controled! OR,you have to discard all of your cells.

zui后,像癌變一樣,細(xì)胞轉(zhuǎn)化也是一種遺傳學(xué)改變,轉(zhuǎn)化細(xì)胞分離培養(yǎng)能夠形成傳代細(xì)胞系。

6. 自己培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化,如何處理?

盡可能維持恒定的培養(yǎng)環(huán)境,出再小面積轉(zhuǎn)化灶時可用細(xì)胞刮機械去除,但治標(biāo)不治本,返還其zui適環(huán)境才是之計。

7. 關(guān)于“人工誘發(fā)體外轉(zhuǎn)化”

一般在遺傳學(xué)研究中應(yīng)用較多,是研究癌變原理的重要方法。癌變,也就是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,是一個發(fā)生在體內(nèi)的過程,便通過體外細(xì)胞培養(yǎng),可以用人工方法誘發(fā)轉(zhuǎn)化,而且重復(fù)性好,從而構(gòu)成體外癌變模型,不僅有理論意義,也可用于篩選抗癌藥物和檢測環(huán)境中致癌物,當(dāng)前在國內(nèi)外這一技術(shù)已普遍應(yīng)用。

 

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