一、目的和要求
1．了解革蘭氏染色法原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。
2．掌握革蘭氏染色的基本步驟。
二、原理
G+、G-細菌的細胞壁成分和結構不同。G+的CW主要有肽聚糖形成的網狀結構組成，在染色過程中，當用95%乙醇處理時，由于脫水而引起網狀結構中的孔徑變小，CW通透性降低，使結晶紫-碘復合物被保留在CW內而不易脫色，因此呈藍紫色。G-的CW中肽聚糖含量低，脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，CW的通透性增加，使結晶紫-碘復合物容易被乙醇抽提出來而脫色，然后又被染上了復染劑的顏色，因此呈現紅色。
三、 菌種：大腸桿菌、
染液：革蘭氏染液
四、操作
具體步驟
制片——固定——初染（結晶紫染液）1-2min——水洗——媒染（碘液）1min——水洗——脫色（95%乙醇至無色——水洗——復染（番紅或復紅染液）1-2min——水洗——干燥——鏡檢
革蘭氏染色的關鍵環節
涂片不宜過厚，以免脫色不*，造成假陽性。
乙醇脫色時間
菌齡：應選擇活躍生的幼培養物作革蘭氏染色。培養時間過長，或死亡及部分自溶，改變了細菌CW的通透性，造成陽性菌的假陰性反應。
火焰固定不宜過熱
媒染劑的作用
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或吸附力，即以某種方式幫助染料固定在細胞上，使之不易脫落。
五、實驗報告
簡述各菌株的染色結果，并分別繪圖示其形態特征。
六、預習
細菌的芽孢染色法
