熒光素標記腫瘤壞死因子α誘導蛋白1抗體IgG，Anti-TNFAIP1/FITC

切片邊緣著色 
切片邊緣著色也是一種常見的現象，這種現象稱為邊緣效應。產生的原因：（1）、組織邊緣與玻片粘貼不牢，邊緣組織松脫漂浮在液體中，每次清洗不易將組織下面試劑洗盡所致。解決辦法：制備的膠片（APES或多聚賴氨酸），切出盡量薄的組織切片，不厚于4微米，組織的前期處理應規范，盡量避免選用壞死較多的組織。（2）、切片上滴加的試劑未充分覆蓋組織，邊緣的試劑容易首先變干，濃度較中心組織高而致染色深。解決辦法：試劑要充分覆蓋組織，應超出組織邊緣2 mm。用DAKO筆畫圈時，為了避免油劑的影響，畫圈應距組織邊緣3-4 mm。 

“陰陽臉”著色 
指組織一半著色一半無著色，形成交界清晰或不甚清晰的兩種染色結果。其成因是試劑僅覆蓋了部分組織而不是全部。如加試劑后未讓試劑流散開而集中在部分組織上。通常應該在加完試劑后，仔細看一遍，是否有的組織未被試劑*覆蓋，如有這種情況，建議用牙簽而不是用吸頭或試劑瓶口將試劑引流開使之將組織全部覆蓋。另外，染片盒不平，切片傾斜，雖然開始試劑已全部覆蓋了組織，但后來試劑流向一邊，部分組織未被試劑覆蓋。對于這種問題，只要留心或想到了很容易發現，也很容易解決。有時，用DAKO（或PAP）筆在組織周圍畫圈時，劃線太靠近或畫到了組織上，由于筆油的力學原理，試劑不能達到靠近劃線附近的組織。還有氣泡也可引起陰陽分明的著色，只是不著色區域是圓形，由于氣泡中含氣，試劑被推到周圍，因此，氣泡中心的組織不著色。解決辦法是滴加試劑時手法要輕，有氣泡時用牙簽捅破。

灶片狀著色 
切片中著色區東一塊西一塊，呈灶片狀分布，出現這種問題的原因有：（1）、裱片時水未排盡，在局部形成氣泡使組織突起，染色時試劑滲入后不易洗盡，顯色過深所致。解決辦法是，漂片盒里的氣泡應去盡，晾片熱臺不能平放，應有45度左右的斜度，利于水流走和蒸發。（2）、壞死組織灶，組織壞死后細胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解，復雜的肽鏈殘段（如Fc段）可能與一抗或/和二抗結合導致zui終著色。解決辦法是在選擇染色切片時應避免選擇壞死組織較多的切片。（3）、制作APES膠片時，膠的濃度太高，干燥后在玻片上留下白色小點，顯色時白色小點著色。解決辦法是按照標準的制備方法進行，即5%鹽酸酒精（5ml鹽酸+95%酒精95ml）浸泡玻片4小時、熱水沖洗玻片1小時、蒸餾水洗玻片1分鐘、丙酮浸泡玻片5秒鐘后空氣干燥（室溫）、2%APES（2 ml APES+98 ml丙酮）浸泡玻片5分鐘、玻片過一下丙酮（1-2秒鐘）、玻片過一下蒸餾水（1-2秒鐘）、37°C過夜干燥、室溫儲存備用。如果制片過程中，因丙酮逐漸揮發而膠變濃時可適當加入一些丙酮。 
5、 間質著色