簡(jiǎn)述：GMP潔凈度檢測(cè)-懸浮粒子浮游菌沉降菌表面微生物目前GMP中給出的標(biāo)準(zhǔn)是動(dòng)態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)，但是作為空調(diào)系統(tǒng)本身的性能確認(rèn)，首先我們要確認(rèn)在靜態(tài)狀態(tài)下潔凈室內(nèi)的環(huán)境（微生物、粒子）是符合要求的，以便于在動(dòng)態(tài)時(shí)如果出現(xiàn)微生物超標(biāo)，為查找原因提供依據(jù)（是本身空調(diào)的性能達(dá)不到還是人員操作帶來的污染），通常藥企的做法是靜態(tài)和動(dòng)態(tài)都做微生物監(jiān)測(cè)。

詳細(xì)介紹

GMP潔凈室潔凈度潔凈度檢測(cè)|塵埃粒子檢測(cè)| 浮游菌測(cè)試|沉降菌檢|表面微生物懸浮粒子浮游菌沉降菌表面微生物，目前GMP中給出的標(biāo)準(zhǔn)是動(dòng)態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)，但是作為空調(diào)系統(tǒng)本身的性能確認(rèn)，首先我們要確認(rèn)在靜態(tài)狀態(tài)下潔凈室內(nèi)的環(huán)境（微生物、粒子）是符合要求的，以便于在動(dòng)態(tài)時(shí)如果出現(xiàn)微生物超標(biāo)，為查找原因提供依據(jù)（是本身空調(diào)的性能達(dá)不到還是人員操作帶來的污染），通常藥企的做法是靜態(tài)和動(dòng)態(tài)都做微生物監(jiān)測(cè)。

潔凈度檢測(cè)綜合性能驗(yàn)證潔凈室潔凈度：懸浮粒子浮游菌沉降菌表面微生物

懸浮粒子

1、取樣點(diǎn)數(shù)量

在GMP附錄1提出懸浮粒子測(cè)試方法可參照ISO14644-1。取樣點(diǎn)最小數(shù)量（NL）可以根據(jù)ISO14644-1中“表A.1-有關(guān)潔凈室區(qū)域的取樣點(diǎn)"進(jìn)行設(shè)計(jì)。如果潔凈室面積小于2m2，可以選定額外的取樣點(diǎn)，同時(shí)考慮GB/T16292-2010的要求，每個(gè)潔凈室取樣點(diǎn)最小數(shù)量一般設(shè)計(jì)為不少于2個(gè)。

使用激光粒子計(jì)數(shù)器對(duì)所有采樣點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試，采樣口均一律垂直向上。

每點(diǎn)連續(xù)采樣3次，記錄每次的數(shù)值，3 次數(shù)據(jù)的平均值代表該點(diǎn)數(shù)值。

檢測(cè) 0.5µm 與 5µm 粒徑的懸浮粒子數(shù)，粒子計(jì)數(shù)器自動(dòng)打印檢測(cè)報(bào)告。檢測(cè)報(bào)告的原始數(shù)據(jù)應(yīng)張貼在的附件中，同時(shí)應(yīng)記錄檢測(cè)的房間名稱、房間編號(hào)、采樣點(diǎn)編號(hào)和采樣的批次。

完成所有房間靜態(tài)懸浮粒子數(shù)的檢測(cè)為一次檢測(cè)完成。在次檢測(cè)合格后，應(yīng)再重復(fù)測(cè)試兩次，三次檢測(cè)結(jié)果均應(yīng)合格。三次檢測(cè)應(yīng)在不同天進(jìn)行。

ISO14644-2015有關(guān)潔凈室區(qū)域的取樣點(diǎn)
潔凈室面積（m2）少于或等于	待測(cè)試的取樣點(diǎn)最小數(shù)量（NL）
2	1
4	2
6	3
8	4
10	5
24	6
28	7
32	8
36	9
52	10
56	11
64	12
68	13
72	14
76	15
104	16
108	17
116	18
148	19
156	20
192	21
232	22
276	23
352	24
436	25
636	26
1,000	27
>1,000	見公式(A.1) NL=27×{A/1000} A代表潔凈室面積 NL代表取樣點(diǎn)數(shù)

2、取樣位置

人員是對(duì)環(huán)境產(chǎn)生活性和非活性微粒的重要因素，通常選擇門口（人員流動(dòng)較大）、操作臺(tái)面附近（生產(chǎn)活動(dòng)多）、回風(fēng)口附近（粒子濃度較大區(qū)域）、距回風(fēng)口最遠(yuǎn)角（容易形成氣流死角）等位置，同時(shí)應(yīng)考慮選擇的取樣位置不能干擾潔凈環(huán)境或增加產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)。

3、取樣量

可由公式Vs=(20/Cn )×1000確定。

公式中：VS代表取樣點(diǎn)的單次；取樣量，用升（L）表示；Cn代表相關(guān)等級(jí)規(guī)定的被考慮粒徑之等級(jí)限值（每立方米的粒子數(shù)量）；20代表粒子濃度處于該等級(jí)限值時(shí)，可被檢測(cè)到的粒子數(shù)。

懸浮粒子取樣量
級(jí)別	Grade A	B級(jí)	C級(jí)	D級(jí)
按5um計(jì)算
靜態(tài)	1000L	689.66L	6.90L	0.69L

潔凈度級(jí)別	動(dòng)態(tài) 懸浮粒子允許數(shù)（顆粒數(shù)/m³）		靜態(tài) 懸浮粒子允許數(shù)（顆粒數(shù)/m³）
潔凈度級(jí)別	≥0.5μm	≥5μm	≥0.5μm	≥5μm
Grade A	3520	20	3520	20
B級(jí)	3520	29	352000	2900
C級(jí)	352000	2900	3520000	29000
D級(jí)	3520000	29000	不作規(guī)定	不作規(guī)定

浮游菌

浮游菌的測(cè)試可參照GB/T 16293-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法。

最少采樣點(diǎn)數(shù)目，可參照ISO 14644-1確定，具體可參照“懸浮粒子測(cè)試采樣點(diǎn)平面圖"。

采樣點(diǎn)位置，可參照ISO 14644-1確定，具體可參照“懸浮粒子測(cè)試采樣點(diǎn)平面圖"。工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。

1、取樣點(diǎn)數(shù)量

參考懸浮粒子要求。

2、取樣位置

除參照“動(dòng)態(tài)"懸浮粒子取樣位置確定要求外，同時(shí)應(yīng)考慮微生物污染極有可能對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成不良影響及可能表現(xiàn)出實(shí)際生產(chǎn)過程中微生物擴(kuò)散最嚴(yán)重的位置或者有助于污染蔓延的區(qū)域。

3、取樣量

參考“靜態(tài)"浮游菌測(cè)試要求。

潔凈度級(jí)別	采樣量L/次
Grade A	1 000
B級(jí)	1000
C級(jí)	500
D級(jí)	100

沉降菌

沉降菌的測(cè)試可參照GB/T 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法。

最少采樣點(diǎn)數(shù)目，可參照ISO 14644-1確定，具體可參照“懸浮粒子測(cè)試采樣點(diǎn)平面圖"。

每個(gè)采樣點(diǎn)采樣一次。

完成所有房間的靜態(tài)沉降菌檢測(cè)為一次檢測(cè)完成。在次檢測(cè)合格后，應(yīng)再重復(fù)測(cè)試兩次，三次檢測(cè)結(jié)果均應(yīng)合格。三次檢測(cè)應(yīng)在不同天進(jìn)行。

1、取樣點(diǎn)數(shù)量

參考“動(dòng)態(tài)"懸浮粒子取樣點(diǎn)數(shù)要求。

2、取樣位置

參考“動(dòng)態(tài)"浮游菌取樣位置選擇要求。

3、最少培養(yǎng)皿數(shù)

參考“靜態(tài)"沉降菌測(cè)試要求。

4.每個(gè)取樣點(diǎn)一般采樣一次，同一位置可使用多個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)并累積計(jì)數(shù)，每個(gè)位置的沉降碟累計(jì)暴露時(shí)間為4小時(shí)。

表面微生物

《藥品GMP指南》質(zhì)量管理體系分冊(cè)、《中國藥典》2020年版四部通則

本測(cè)試方法利用接觸碟法收集潔凈區(qū)（室）設(shè)備以及與產(chǎn)品接觸表面的微生物，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的方法和條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評(píng)定潔凈區(qū)（室）設(shè)備以及與產(chǎn)品接觸表面的微生物數(shù)，并以此來評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。

接觸碟：一般采用φ55mm無菌接觸碟。

接觸碟法（用于平整、光滑表面的微生物取樣）：

取樣：表面微生物監(jiān)測(cè)用于表面菌監(jiān)測(cè)，接觸碟法廣泛應(yīng)用。取樣時(shí)，打開碟蓋，無菌培養(yǎng)基表面與被取樣表面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與被取樣表面接觸。取樣后，需要立即用75%酒精擦拭被取樣表面，以除去殘留瓊脂。取樣后的胰酪大豆胨瓊脂接觸碟在30-35℃培養(yǎng)72小時(shí)。

級(jí)別	接觸碟φ55mm cfu/碟	擦拭法（25cm²）cfu/拭子
A	＜1	＜1
B	5	5
C	25	25
D	50	50

1、取樣點(diǎn)數(shù)量

依據(jù)表面微生物取樣位置評(píng)估結(jié)果確定。

2、取樣位置

通常考慮每個(gè)生產(chǎn)環(huán)境與產(chǎn)品的接觸程度，很可能給產(chǎn)品帶來生物負(fù)荷的位置，包括最難接近或最難清潔、滅菌或消毒位置，設(shè)備表面，儲(chǔ)存容器，傳送帶，人員手套及墻壁、地面、門把手、椅子、測(cè)試儀器、傳遞窗、控制面版等位置；同時(shí)應(yīng)考慮選擇的取樣位置不能干擾潔凈環(huán)境或增加產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)。

潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)⁽¹⁾如下：
潔凈度級(jí)別	浮游菌 cfu/m³	沉降菌（f90mm） cfu /4小時(shí)⁽²⁾	表面微生物
潔凈度級(jí)別	浮游菌 cfu/m³	沉降菌（f90mm） cfu /4小時(shí)⁽²⁾	接觸（f55mm） cfu /碟	5指手套 cfu /手套
Grade A	<1	<1	<1	<1
B級(jí)	10	5	5	5
C級(jí)	100	50	25	－
D級(jí)	200	100	50	－

潔凈室區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)
項(xiàng) 目		Grade A	B級(jí)	C級(jí)	D級(jí)
浮游菌 cfu/ m3	合格限值	<1	10	100	200
	糾偏限值	0.75	7.5	75	150
	警戒限值	0.5	5	50	100
沉降菌（∮90mm） cfu/ 4h	合格限值	<1	5	50	100
	糾偏限值	0.75	3.5	35	75
	警戒限值	0.5	2.5	25	50
表面微生物（∮55mm) cfu/皿	合格限值	<1	5	25	50
	糾偏限值	0.75	3.5	18	40
	警戒限值	0.5	2.5	12	25