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熒光偏振免疫分析
點(diǎn)擊次數(shù)：341 發(fā)布時(shí)間：2012-5-10
熒光偏振免疫分析法（fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA）是一種定量免疫分析技術(shù)，其基本原理是熒光物質(zhì)經(jīng)單一平面的藍(lán)偏振光（485nm）照射后，吸收光能躍入激發(fā)態(tài)，隨后回復(fù)至基態(tài)，并發(fā)出單一平面的偏振熒光（525nm）。偏振熒光的強(qiáng)弱程度與熒光分子的大小呈正相關(guān)，與其（受激發(fā)時(shí)）轉(zhuǎn)動(dòng)的速度呈反相關(guān)。FPIAzui適宜檢測(cè)小至中等分子物質(zhì)，常用于藥物、激素的測(cè)定。
FPIA采用競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的原理，在缺乏未標(biāo)記分析物（通常是待測(cè)樣品）時(shí)熒光信號(hào)zui強(qiáng)；加入末標(biāo)記分析物后，在已標(biāo)記和未標(biāo)記樣品之間的競(jìng)爭(zhēng)將減弱熒光信號(hào)。熒光信號(hào)強(qiáng)度與游離的分析物的濃度成正比，與待測(cè)樣品中未標(biāo)記分析物的濃度成反比。通過(guò)測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)晶，繪制競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)曲線比較而得到定量值。以測(cè)定半抗原藥物的濃度為例，反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)除待測(cè)藥物外，同時(shí)加入一定量用熒光物質(zhì)標(biāo)記的相應(yīng)藥物（小分子），二者與有*的特異性抗體（大分子）競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。當(dāng)待測(cè)藥物濃度高時(shí)，經(jīng)過(guò)競(jìng)爭(zhēng)，與大部分抗體結(jié)合，而標(biāo)記藥物則呈游離的小分子狀態(tài)，因此在液相中轉(zhuǎn)動(dòng)速度較快，測(cè)得的偏振熒光強(qiáng)度也較低。反之，待測(cè)藥物濃度低時(shí)，大部分標(biāo)記藥物與抗體結(jié)合，形成大分子的標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，在液相中轉(zhuǎn)動(dòng)速度較慢，此時(shí)檢測(cè)到的偏振熒光強(qiáng)度也較高。測(cè)定反應(yīng)系統(tǒng)的偏振光大小，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可地得知樣品中待測(cè)藥物的相應(yīng)含量。
FPIA法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，例如測(cè)定Digoxin的靈敏度可達(dá)0．2ng／m1，精密度高、速度快、操作簡(jiǎn)便，樣品用量少，儀器不需要每日校準(zhǔn)。缺點(diǎn)是儀器設(shè)備昂貴，藥品試劑盒專屬性強(qiáng)，需進(jìn)口。