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YIJI體液葡萄糖氧化酶比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI  體液葡萄糖氧化酶比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化物酶的雙酶反應(yīng)

體系中，葡萄糖氧化產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，與顯色染料鄰聯(lián)茴香胺發(fā)生反應(yīng)，在分光光度儀下，產(chǎn)生吸光峰值

的變化，即采用比色法測(cè)定體液樣品中葡萄糖氧化酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)

家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種體液（血液、尿液等）葡萄糖氧化酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格

無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase；EC1.1.3.4），又稱(chēng)為葡萄糖氧氣氧化還原酶（β-D-Glucose:oxygen

1-oxidoreductase），是一種黃素酶（flavoenzyme）。其分子量為160kd，有同源雙體構(gòu)成。葡萄糖氧化酶的

作用在于特異性地催化β-D-葡萄糖，而不是α-D-葡萄糖的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生δ-葡萄糖酸內(nèi)酯

（gluco-delta-lactone）和過(guò)氧化氫。葡萄糖氧化酶通常應(yīng)用于體液、食物和農(nóng)作物中游離葡萄糖的濃度檢

測(cè)；其次，在食品工業(yè)上，用于食品包裝中去氧等。基于底物葡萄糖，在葡萄糖氧化酶的催化下，氧化產(chǎn)

生過(guò)氧化氫，在過(guò)氧化物酶（peroxidase）的作用下，使顯色染料還原型鄰聯(lián)茴香胺（reduced o-dianisidine）

轉(zhuǎn)化為氧化型鄰聯(lián)茴香胺（oxidized o-dianisidine），在分光光度儀（500nm  波長(zhǎng)）下，呈現(xiàn)吸光峰值的變

化，來(lái)檢測(cè)樣品中葡萄糖氧化酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI緩沖液（Reagent  A）    毫升

YIJI反應(yīng)液（Reagent  B）    毫升

YIJI底物液（Reagent  C）    毫升

YIJI催化液（Reagent  D）    毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                  1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；YIJI反應(yīng)液（Reagent  B）避免光照；有效保證6月

用戶(hù)自備

抗凝管：用于血液采集的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于反應(yīng)液配制的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備

氧氣罐：用于試劑充氧

1比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 樣品準(zhǔn)備

選擇一：血漿樣品

1． 準(zhǔn)備好肝素或 EDTA抗凝管（注意：避免使用  ACD抗凝管）

2． 抽取 1毫升血液，置于抗凝管里

3． 放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心 10分鐘，速度為  700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）

4． 小心移取上層黃色液體到新的 1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）

5． 移取  10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用YIJI  Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－

YIJI30030.1）

6． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

選擇二：血清樣品

1．  準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管

2． 抽取 1毫升血液，置于儲(chǔ)存管里

3． 室溫下，靜置 30分鐘，直至血液凝結(jié)

4． 放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心 15分鐘，速度為  2000g（或 5000RPM，例如 eppendorf 5415）

5． 小心移取上層黃色液體到新的 1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）

6． 移取  10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用YIJI  Bradford  蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－

YIJI30030.1）

7． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

選擇三：尿液/腦脊液/唾液/精液樣品

1． 準(zhǔn)備好 1.5毫升離心管

2． 移取 1毫升液體到離心管

3． 放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心 10分鐘，速度為  700g（或 3000RPM，例如 eppendorf 5415）

4． 小心移取上清液到新的 1.5毫升離心管

5． 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)－70℃冰箱里保存

二、 測(cè)讀準(zhǔn)備

1． 準(zhǔn)備好上述制備的樣品，置于冰槽里融化

2． 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng) 500nm，間隔 1分鐘，讀數(shù)  6次（共  5分鐘），并置零或設(shè)置  0分鐘和  5分鐘各測(cè)讀 1次

3． 檢測(cè)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑置入冰槽里融化，然后移出 xx毫升  YIJI緩沖液

（Reagent  A）到新的 15毫升離心管，加入  xx微升  YIJI反應(yīng)液（Reagent   B）和 xx毫升

YIJI底物液（Reagent  C），充分混勻后，標(biāo)記為 YIJI反應(yīng)工作液，置于冰槽里，避

免光照。

4． （選擇步驟）接上氧氣進(jìn)行充氧 5分鐘后使用（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)  4）

三、 背景對(duì)照測(cè)定

1． 移取 xx毫升  YIJI反應(yīng)工作液到新的  3毫升比色皿

2． 加入 xx微升  YIJI催化液（Reagent  D）

3． 室溫下孵育 2分鐘

4． （選擇步驟）放進(jìn)分光光度儀，置零

5． （選擇步驟）取出比色皿

6． 加入 xx微升  YIJI緩沖液（Reagent  A）

7． 上下傾倒數(shù)次，混勻

8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，此為背景空對(duì)照（5分鐘讀數(shù)－0分鐘讀數(shù)）

四、 樣品測(cè)定

1． 移取 xx毫升  YIJI反應(yīng)工作液到新的  3毫升比色皿

2． 加入 xx微升  YIJI催化液（Reagent  D）

3． 室溫下孵育 2分鐘

4． （選擇步驟）放進(jìn)分光光度儀，置零

5． （選擇步驟）取出比色皿

6． 加入 100微升待測(cè)樣品

7． 上下傾倒數(shù)次，混勻

8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，此為樣品讀數(shù)（5分鐘讀數(shù)－0分鐘讀數(shù)）

五、計(jì)算樣品活性

【（樣品讀數(shù)－背景讀數(shù)）X xx（毫升；體系容量）X樣品稀釋倍數(shù)】÷【xx（毫升；樣品容量）X   xx（毫

摩爾吸光系數(shù)）X xx（反應(yīng)時(shí)間；分鐘）X2 】＝單位/毫升或微摩爾 β-D-葡萄糖/分鐘/毫升

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為 20次操作，包括背景對(duì)照

2． 操作時(shí)，須戴手套；YIJI反應(yīng)液（Reagent  B）具有毒性，注意操作安全

3． 每增加 1個(gè)樣品，增加  YIJI反應(yīng)工作液為：YIJI緩沖液（Reagent   A）2毫升＋YIJI

反應(yīng)液（Reagent B）300微升＋YIJI底物液（Reagent   C）500微升，以此類(lèi)推。配制反應(yīng)工作

液時(shí)，須根據(jù)樣本數(shù)量配制實(shí)際工作液容量

4．  YIJI反應(yīng)工作液配制后，可以接上氧氣進(jìn)行充氧  5分鐘后使用，充氧與未充氧的酶活性關(guān)系為：

充氧酶活性 X 0.6＝未充氧酶活性；注意顯示數(shù)據(jù)時(shí)指明為充氧或未充氧狀態(tài)

5． 系統(tǒng)操作過(guò)程中，背景測(cè)定只需 1次

6． 加樣后 3秒內(nèi)進(jìn)行比色測(cè)定

7． 比色測(cè)定后，比色皿須清洗*

8． 樣本測(cè)定 5分鐘讀數(shù)高于0分鐘讀數(shù)表明具有酶活性；如果計(jì)算酶動(dòng)力學(xué)，選擇線(xiàn)性段單位時(shí)間的差值

9． 葡萄糖氧化酶活性單位濃度定義：在 25℃室溫下，pH 5.1的情況下，每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)（每分鐘）

氧化 1微摩爾的  β-D-葡萄糖為葡萄糖酸內(nèi)酯和過(guò)氧化氫

10．如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高，則可以增加或降低樣本量

11．本公司提供系列營(yíng)養(yǎng)學(xué)試劑產(chǎn)品