開展無菌檢查和微生物極限檢查，首先要按照《藥品檢驗所實驗室質量管理規范》和《藥品生產質量管理規范》的要求，建立布局合理、使用方便、操作安全的無菌室，并配備完善的實驗設施和管理體系。無菌檢查、微生物極限檢查和疫苗接種室(疫苗接種對照菌)應嚴格分離，危險毒株、破傷風梭菌、等毒素應單獨使用，以控制和防止傳播。

　　(一)潔凈實驗室。

　　1.潔凈室布局。

　　根據樣品檢驗要求，至少應包括更衣緩沖系統、微生物極限檢查室、無菌檢查室、陽性菌室和物流通道。

　　更衣系統應至少包括一更(含更鞋)、二更(含洗手)、緩沖和人流走廊等。

　　物流通道應考慮污水凈化分流的布局，有條件的可設置污水走廊。

　　2.潔凈室的設計要求。

　　凈化等級：潔凈走廊。檢查室。陽性菌室應為1萬級;其他房間應為10萬級。

　　氣流組織:陽性菌室對走廊負壓，走廊正壓緩沖5Pa;陽性菌室全排氣電氣控制:外置控制開關;設置通信系統。

　　3.結構和要求。

　　無菌潔凈室不宜位于底層，防潮、防霉、采光好，遠離交通主干道、衛生間、污染區，面積不超過10m2，高度不超過2.4m，由兩個緩沖室和操作室組成。操作室緩沖之間應有樣品傳送窗，進出操作室和緩沖室之間的門不應直接對齊。無菌室六面光滑平整，無縫隙，無灰塵，無灰塵，耐腐蝕，易清洗，墻面與地面。墻壁與天花板的連接處應為凹弧形，操作室不得安裝下水道。

　　無菌室內照明燈應嵌入天花板內，采光面積大，光照分布均勻，光照度不低于300勒克斯。緩沖室和手術室應配備紫外線殺菌燈(2-25w/m3)，用于空氣消毒。紫外線波長200-300nm的具有殺菌作用，其中265-266nm殺菌效果強，與DNA吸收光譜范圍一致。其殺菌機制可能是在細菌細胞DNA中形成胸腺嘧啶雙聚體，從而干擾細菌細胞DNA的復制，導致細菌變異死亡。紫外線殺菌燈距離1m以內殺菌效果好，每次開燈照射時間為30min。紫外線燈的輻射強度應定期檢查，距離不應小于70μWcm-21m。缺點是穿透力弱，紙板可以阻礙光線的通過，不能穿透固體物體，只能用于表面消毒和一些不耐熱或化學消毒劑的消毒。

　　4.溫度。

　　無菌室內溫度和相對濕度直接影響紫外線殺菌燈的殺菌效果，因此溫度控制在25±2℃，相對濕度為40-60%。手術室或凈化工作臺的清潔空氣應對環境保持正壓，不少于49Pa。

　　5.操作室。

　　空氣除菌過濾層流裝置和調溫裝置應安裝在無菌室內。

　　潔凈度要求：凈化工作臺潔凈度100級，無菌室1萬級。

　　操作室應準備乙醇燈(或氣燈)、火柴、2%棉球、75%乙醇棉球、試管架、橡膠乳頭、砂輪、記號筆、無菌剪刀、鑷子、注射器等。微生物極限檢查無菌室操作室還應有電子稱(感覺0.1g，大稱量300g)、電動均漿儀等。

　　6.緩沖間。

　　緩沖室內應有洗手盆、消毒液、無菌衣服、帽子、口罩、拖鞋等緩沖室內不得放置培養箱等雜物。

　　(二)使用潔凈室。

　　1.實驗開始前1小時啟動風扇系統(空調系統)，空氣消毒裝置至少半小時關閉。

　　2.觀察并確保潔凈室的壓差。

　　3.物品通過物流通道進入潔凈室。

　　4.人員正確著裝后，通過人流通道進入潔凈室。

　　5.使用后，用消毒劑清潔工作臺。實驗人員在更衣室更換無菌工作服，然后離開清潔工作室。打開空氣消毒裝置，消毒至少半小時閉清潔工作室的控制開關。

　　(3)潔凈室的清潔和維護。

　　1.潔凈室的清潔和維護分為日常維護、定期維護和不合格維護。

　　2.日常維護由每次實驗的實驗人員進行，維護范圍為潔凈工作室和輔助潔凈區，維護頻率為每次實驗后。

　　3.定期維護由實驗室的專人進行，維護范圍為所有清潔工作室，維護頻率為每兩周一次。

　　4.不合格的維護由實驗人員進行，維護范圍為所有不合格的潔凈室，維護時間為不合格的。

　　(四)潔凈室驗證。

　　1.驗證項目：

　　清潔度、微生物數、通風次數、靜壓差、照度、溫度、相對濕度。

　　2.驗證的技術要求。

　　驗證項目10萬級1萬級100級。

　　溫度(℃)18-2620-2420-24。

　　相對濕度(%)45-6545-6045-60。

　　換氣次數(次/h)不少于15或25。

　　壓差(pa)相對于室外:10級差的潔凈室之間:

　　照度(Lx)主工作室≥300輔助工作室≥150。

　　懸浮粒數(粒/m3)≥0.5um≥5um2000020000。

　　5001005浮游菌數(個/m3)。

　　1031沉降菌(個/皿)。

　　3.建議驗證周期每半年一次，驗證次數也可根據潔凈室的使用頻率適當增加。

　　4.驗證方法的清潔度和微生物數:GB/T16292~16294-1996，其他項目:參考JGJ71-90。

　　5.驗證不符合項的處理。

　　當潔凈度、微生物數、通風次數、靜壓差等指標不符合時，應停止使用潔凈室。凈化系統調整后，應重新驗證，直至符合規定。

　　當溫度、相對濕度、照度等指標不一致時，潔凈室不需要停止使用，但應及時修復空調系統(或更換照明裝置)，使其符合要求。