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上海祁立：臥螺離心機(jī)在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用測試實(shí)例
1.差速沉降離心法的舉例：
這是zui普通的離心法。即采用逐漸增加臥螺離心機(jī)離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使沉降速度不同的顆粒，在不同的離心速度及不同離心時(shí)間下分批分離的方法。此法一般用于分離沉降系數(shù)相差較大的顆粒。
差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時(shí)間。當(dāng)以一定的離心力在一定的離心時(shí)間內(nèi)進(jìn)行離心時(shí)，在離心管底部就會得到zui大和zui重顆粒的沉淀，分出的上清液在加大轉(zhuǎn)速下再進(jìn)行離心，又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液，如此多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉淀是不均一的，仍雜有其它成分，需經(jīng)過2～3次的再懸浮和再離心，才能得到較純的顆粒。
上海總部：繆
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地址：上海市閔行區(qū)龍茗路2795號220-221室
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公司：http://www.doser-qilee.com/
此法主要由于組織勻漿液中分離細(xì)胞器和病毒，其優(yōu)點(diǎn)是：操作簡易，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子。缺點(diǎn)是：須多次離心，沉淀中有夾帶，分離效果差，不能一次得到純顆粒，沉淀于管底的顆粒受擠壓，容易變性失活。
2.密度梯度區(qū)帶離心法(簡稱區(qū)帶離心法)：
區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒;②適應(yīng)范圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形，能保持顆粒活性，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。
此法的缺點(diǎn)是：①離心時(shí)間較長;②需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液;③操作嚴(yán)格，不易掌握。
密度梯度區(qū)帶離心法又可分為兩種：
(1)差速區(qū)帶離心法：當(dāng)不同的顆粒間存在沉降速度差時(shí)(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差)。臥螺式污泥脫水機(jī)組，在一定的離心力作用下，顆粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒 (20%的沉降系數(shù)差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質(zhì)，與顆粒的密度無關(guān)，大小相同，密度不同的顆粒(如線粒體，溶酶體等)不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液，樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上，離心時(shí)，由于離心力的作用，顆粒離開原樣品層，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時(shí)間后，沉降的顆粒逐漸分開，zui后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶，沉降系數(shù)越大，往下沉降越快，所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低，離心必須在沉降zui快的大顆粒到達(dá)管底前結(jié)束，樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液，其zui大密度和濃度可達(dá)1.28kg/cm3和60%。此離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間。
(2)等密度區(qū)帶離心法：離心管中預(yù)先放置好梯度介質(zhì)，樣品加在梯度液面上，或樣品預(yù)先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管，污泥脫水機(jī)通過離心形成梯度，這就是預(yù)形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式。
離心時(shí)，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動到與它們的密度相等的等密度點(diǎn)的特定梯度位置上，形成幾條不同的區(qū)帶，這就是等密度離心法。體系到達(dá)平衡狀態(tài)后，再延長離心時(shí)間和提高轉(zhuǎn)速已無意義，處于等密度點(diǎn)上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時(shí)間所影響，提高轉(zhuǎn)速可以縮短達(dá)到平衡的時(shí)間，離心所需時(shí)間以zui小顆粒到達(dá)等密度點(diǎn)(即平衡點(diǎn))的時(shí)間為基準(zhǔn)，有時(shí)長達(dá)數(shù)日。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒大小和形狀無關(guān)，但大小和形狀決定著達(dá)到平衡的速度、時(shí)間和區(qū)帶寬度。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化絕CSCl，其密度可達(dá) 1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細(xì)胞器等，也可以分離復(fù)合蛋白質(zhì)，但簡單蛋白質(zhì)不適用。
收集區(qū)帶的方法有許多種，例如：
(1)用注射器和滴管由離心管上部吸出。
(2)有針刺穿離心管底部滴出。
(3)用針刺穿離心管區(qū)帶部份的管壁，把樣品區(qū)帶抽出。
(4)用一根細(xì)管插入離心管底，泵入超過梯度介質(zhì)zui大密度的取代液，將樣品和梯度介質(zhì)壓出，用自動部分收集器收集。
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