適用儀器

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備樣品 (50 µL)
2.添加 50 µL 高斯熒光素酶工作溶液
3.室溫孵育 10 - 15 分鐘
4.檢測發光強度

溶液制備 

1.儲備溶液的配制

高斯熒光素酶原液 (100X)

將 50 µL（適用于 Cat#12530）、0.5 mL（適用于 Cat#12531）或 2.5 mL（適用于 Cat#12532）反應緩沖液（組分 B）轉移至 1 瓶熒光素酶底物（組分 A）中，并充分混合。注意：添加前，先短暫離心，然后打開熒光素酶底物（組分 A）小瓶。

1.工作溶液配制

使用檢測緩沖液（組分 C）按 1:100 稀釋倍數稀釋 100X 高斯熒光素酶檢測儲備液，制備 高斯熒光素酶工作液。

注意：重構的 高斯熒光素酶工作溶液對光非常敏感。它不穩定，應新鮮配制，置于冰上，并在 2 小時內使用。

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樣品操作及分析

1. 通過在所需化合物緩沖液中添加 10 µL 10X 測試化合物（96 孔板）或 5 µL 5X 測試化合物（384 孔板），用測試化合物處理細胞（或樣品）。對于空白孔（不含細胞的培養基），添加相應量的化合物緩沖液。

2. 將細胞板在 37°C、5% CO2 培養箱中孵育所需的時間，通常為 4 小時至過夜。

3. 運行 Gaussia 熒光素酶測定：將 50 µL/孔/96 孔板或 12.5 µL/孔/384 孔板連續稀釋的 Gaussia 熒光素酶或培養上清液移至微量滴定板中，然后與 50 µL/孔/96-孔板混合。 Gaussia 熒光素酶工作溶液的孔板或 12.5 µL/孔/384 孔板。

4. 將孔板在室溫下避光孵育 10 至 15 分鐘。

5. 用光度計讀取發光強度。