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Ex (nm)	571	Em (nm)	584

Amplite 比色法葡萄糖定量試劑盒 葡萄糖是一種單糖，是生物學(xué)中最重要的碳水化合物。它是細(xì)胞生長的能量和代謝的中間產(chǎn)物。作為光合作用的主要產(chǎn)物之一，葡萄糖在原核生物和真核生物中都開始細(xì)胞呼吸。葡萄糖水平是許多代謝性疾病例如糖尿病的關(guān)鍵診斷參數(shù)。該試劑盒提供了一種快速，靈敏的葡萄糖測量方法。它使用基于葡萄糖氧化酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)通過產(chǎn)生過氧化氫來檢測葡萄糖，該過氧化氫由我們的Amplite Red過氧化物酶底物進(jìn)行檢測。 Amplite Red過氧化物酶底物可通過酶標(biāo)儀在約570 nm處讀取。該測定可以輕松適用于需要測量葡萄糖的多種應(yīng)用。該測定法具有非常低的背景，因?yàn)樗诩t色可見光范圍內(nèi)運(yùn)行，可明顯降低來自生物樣品的干擾。使用該試劑盒，可以檢測低至3 µM D-葡萄糖。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Amplite 比色法葡萄糖定量試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

準(zhǔn)備并添加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50μL）
準(zhǔn)備并添加葡萄糖分析工作溶液（50μL）
在37°C孵育10-30分鐘
檢測OD值=570nm左右的吸光度

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1Amplite 紅色儲(chǔ)備液（250X）：
將100μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應(yīng)立即使用原液。任何剩余的溶液應(yīng)等分并在-20℃重新冷凍。注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基*醇存在下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰基*醇的濃度應(yīng)不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的分析緩沖液（pH 7.4）。

1.2辣根過氧化物酶（HRP）儲(chǔ)備液（10 U / mL）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。注意：未使用的HRP溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

1.3葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入葡萄糖氧化酶（組分D）的小瓶中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液應(yīng)分為一次性等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

1.4葡萄糖原液（800mM）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入葡萄糖小瓶（組分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
通過將適量的800mM葡萄糖儲(chǔ)備溶液稀釋到測定緩沖液（組分B）中來制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，以產(chǎn)生30μM的葡萄糖濃度。然后在測定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到約10,3,1,0.3,0.1和0.03μM連續(xù)稀釋的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品。包括非葡萄糖緩沖液對照作為空白對照。

3.工作溶液配制

表1.一個(gè)透明底96孔微孔板的分析工作溶液（2X）

組分	容積
Amplite 紅色儲(chǔ)備液（250x）	20ul
HRP儲(chǔ)備液（10 U / mL）	100ul
葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）	100ul
分析緩沖液	4.78ml
總?cè)莘e	5ml